溫性經(jīng)筋通貼膏質(zhì)量標準提高及體外透皮性能研究.pdf

1、目的:
　　1.建立溫性經(jīng)筋通貼膏的薄層鑒別方法，完善質(zhì)量標準。
　　2.建立溫性經(jīng)筋通貼膏中補骨脂素、異補骨脂素、鹽酸小檗堿含量測定方法，進一步提高質(zhì)量控制標準，同時為溫性經(jīng)筋通貼膏的體外釋放及透皮性能奠定含量測定方法基礎(chǔ)。
　　3.對溫性經(jīng)筋通貼膏中補骨脂素、異補骨脂素、鹽酸小檗堿從基質(zhì)骨架材料釋放的特性進行研究。
　　4.對溫性經(jīng)筋通貼膏中補骨脂素、異補骨脂素、鹽酸小檗堿透皮特性進行研究。
　　5.制

2、備缺冰片、氮酮的溫性經(jīng)筋通貼膏，研究處方中冰片、氮酮對補骨脂素、異補骨脂素、鹽酸小檗堿透皮性能產(chǎn)生的影響。
　　方法與結(jié)果:
　　1.通過參考《中國藥典》（2010年版）和成方制劑的鑒別方法，我們對溫性經(jīng)筋通貼膏處方藥味的薄層鑒別方法進行了研究，經(jīng)過反復(fù)試驗和堅持不懈的探索，最終建立了方中補骨脂、關(guān)黃柏、冰片、大黃、黃芪的薄層鑒別方法，方中其他藥味由于陰性存在干擾或者方法耐用性能欠佳，未能確定薄層鑒別方法。
　　2.采

3、用雙波長HPLC法，通過反復(fù)實驗，我們建立了同時測定補骨脂素、異補骨脂素、鹽酸小檗堿的HPLC方法:采用Inertsil ODS-SP C18柱(4.6mm×150mm，5μ m)色譜柱;以乙腈-0.1％磷酸溶液(25∶75)為流動相;流速為1.0 mL/min;柱溫為30℃;進樣量10μL;檢測波長為246nm（補骨脂素、異補骨脂素）、345nm（鹽酸小檗堿）。結(jié)果顯示，溫性經(jīng)筋通貼膏含量測定的標準曲線中補骨脂素、異補骨脂素、鹽酸小檗

4、堿均在0.8-48μ g/mL的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程分別為:(Y)=72355.0X+28120.0(r=0.9995),(Y)=78893.4X+12795.2(r=0.9999),(Y)=39918.4X+4128.01(r=0.9999);接收液含量測定的標準曲線中補骨脂素、異補骨脂素、鹽酸小檗堿均在0.05-6.0μg/mL的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程分別為:(Y)=78608.6X-301.617(r=0.9999)

5、，(Y)=84889.7X+161.986(r=0.9999)，(Y)=43611.3X-1363.93(r=0.9999)，平均回收率分別為101.80％(RSD=2.84％),100.61％(RSD=3.84％),99.12％(RSD=3.67％)。
　　3.根據(jù)被測成分的性質(zhì)對溫性經(jīng)筋通貼膏體外釋放和透皮實驗所用的接收液種類進行了篩選，采用直立式Franz改良擴散池，以貼膏膏體面直接接觸接收液的方式，通過測定不同時間點接收液

6、內(nèi)成分的含量，計算24h累積透過百分率，以Higuchi方程的擬合度（相關(guān)系數(shù)）為指標，選取擬合度最佳的接收液種類。結(jié)果表明，含20％乙醇的生理鹽水樣品的擬合度最高，釋放速率也相對較高，定為溫性經(jīng)筋通貼膏體外釋放和透皮研究的接收液。其中補骨脂素、異補骨脂素、鹽酸小檗堿的24h累積釋放率分別為:47.58％，44.14％，31.64％;平均釋放速率分別為:10.7309μ g·cm-2·h-1，6.5292μg·cm-2· h-1,7.2

7、532μ g·cm-2· h-1。
　　4.參照體外釋放實驗，采用健康SD大鼠腹部皮膚作為透過皮膚，計算24h累積透過百分率，將不同時間點的透過率與時間進行Higuchi方程擬合，求得透皮速率。結(jié)果顯示，補骨脂素、異補骨脂素透過實驗皮膚的24h累積透過率分別為:6.83％，3.81％，遠遠低于其24h累積釋放率;平均透皮速率分別為:1.8674μ g·cm-2·h-1，0.6959μg·cm-2·h-1，亦遠遠低于它們的24h累積

8、釋放率。在各個時間點的透皮接收液中，均未檢測出鹽酸小檗堿。
　　5.按照溫性經(jīng)筋通貼膏處方，分別制備缺冰片和氮酮的溫性經(jīng)筋通貼膏、缺冰片的溫性經(jīng)筋通貼膏、缺氮酮的溫性經(jīng)筋通貼膏，再參照溫性經(jīng)筋通貼膏透皮實驗方法，考察缺冰片和氮酮的溫性貼膏中補骨脂素、異補骨脂素24h累積透過百分率，并與含有處方量冰片和氮酮的溫性經(jīng)筋通貼膏相比，明確冰片和氮酮對它們透皮行為產(chǎn)生的影響。結(jié)果顯示，在缺冰片和氮酮的貼膏中，補骨脂素的24 h累計透過百分率

9、為0.92％，平均透皮速率是0.2483μ g·cm-2·h-1，比溫性經(jīng)筋通貼膏的補骨脂素的透皮速率減少43.22倍;在缺冰片的貼膏中，補骨脂素的24 h累計透過百分率為1.13％，平均透皮速率是0.3006μ g·cm-2·h-1，比溫性經(jīng)筋通貼膏的補骨脂素的透皮速率減少35.70倍;在缺氮酮的貼膏中，補骨脂素的24 h累計透過百分率為0.96％，平均透皮速率是0.2681μg·cm-2·h-1，比溫性經(jīng)筋通貼膏的補骨脂素的透皮速率

10、減少40.03倍，在缺冰片或者氮酮的溫性經(jīng)筋通貼膏透皮接收液中均未檢測出異補骨脂素。
　　結(jié)論:
　　1.本次研究建立的方中補骨脂、關(guān)黃柏、冰片、大黃、黃芪的薄層鑒別方法操作簡便、專屬性好，穩(wěn)定性強，可用于溫性經(jīng)筋通貼膏的質(zhì)量控制，建議列入該制劑質(zhì)量標準正文。
　　2.我們建立的可同時測定補骨脂素、異補骨脂素、鹽酸小檗堿的HPLC方法，具有穩(wěn)定、可靠、結(jié)果準確、重復(fù)性好等優(yōu)點，可用于溫性經(jīng)筋通貼膏的含量控制，建議納入該

11、制劑質(zhì)量標準。
　　3.20％乙醇的生理鹽水樣品的擬合度最高，釋放速率也相對較高，選作為接收液。通過溫性經(jīng)筋通貼膏體外釋放的實驗研究，我們得知補骨脂素、異補骨脂素、鹽酸小檗堿均具有良好的自骨架釋放至接收液的性能，24h累積釋放率均在31.64％以上。
　　4.透皮實驗中補骨脂素、異補骨脂素透過實驗皮膚的24h累積透過率為6.83％和3.81％，明顯小于24h累積釋放率，說明皮膚是經(jīng)皮給藥制劑進入體內(nèi)發(fā)揮療效的主要障礙。在透皮

12、接收液中，未能檢測出鹽酸小檗堿，可能也與其理化性質(zhì)有關(guān)，也或者由于該成分與皮膚親和力較低所致。
　　5.通過對缺冰片、氮酮的溫性經(jīng)筋通貼膏的透皮研究，我們發(fā)現(xiàn)，含有處方量冰片和氮酮貼膏比缺冰片和氮酮貼膏中補骨脂素和異補骨脂素的透皮速度和程度明顯增加，說明冰片和氮酮對補骨脂素、異補骨脂素有明顯的透皮促滲作用。鹽酸小檗堿的24h累積釋放率已達到31.64％，但在透皮實驗中未能檢測到鹽酸小檗堿，說明冰片和氮酮對鹽酸小檗堿未能產(chǎn)生與補骨脂