臍帶間充質(zhì)干細胞兩種分離工藝的比較及對臍血來源CD4+T細胞免疫調(diào)控的研究.pdf

1、臍帶間充質(zhì)干細胞是一類具有自我更新和多向分化潛能的成體干細胞，具有免疫調(diào)節(jié)、造血支持和組織修復(fù)等功能，其分離方法和免疫功能的研究對自身免疫性疾病和移植物抗宿主病的臨床治療具有重要意義。本研究工作主要包括三部分內(nèi)容。
　　首先，比較臍帶間充質(zhì)干細胞兩種分離工藝，分辨優(yōu)劣。通過酶消化法與組織爬片法從臍帶中分離和培養(yǎng)間充質(zhì)干細胞，倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)、流式細胞術(shù)檢測表面標志、繪制細胞生長曲線及分別向成骨誘導(dǎo)鑒定多向分化潛能。
　

2、　研究顯示兩種方法均能有效分離純化臍帶間充質(zhì)干細胞，表面標志與成骨分化能力沒有顯著差異，但是組織爬片法在成功率、細胞增殖能力及實驗成本等方面占有一定優(yōu)勢。結(jié)果表明，組織爬片法分離臍帶間充質(zhì)干細胞更符合標準化及規(guī)?；囊?，因而更值得推廣。
　　第二部分是研究臍帶間充質(zhì)干細胞對異源臍血CD4+T淋巴細胞增殖及分化的免疫調(diào)控作用。按不同比例建立臍帶間充質(zhì)干細胞與PHA活化的臍血CD4+T淋巴細胞直接接觸與Transwell共培養(yǎng)體系，

3、血細胞計數(shù)儀檢測CD4+T淋巴細胞增殖情況、流式檢測CD4+CD25+/CD4+比率變化及熒光定量PCR檢測調(diào)節(jié)性T細胞標志基因Foxp3相對表達量的變化。
　　研究表明臍帶MSCs明顯抑制了PHA活化的臍血CD4+T淋巴細胞的增殖，提高了CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞在CD4+T淋巴細胞中的比率及基因Foxp3的相對表達量。以上這些效應(yīng)均與臍帶MSCs的數(shù)量呈正相關(guān)，且直接接觸共培養(yǎng)效應(yīng)強于Transwell共培養(yǎng)。臍帶MSCs

4、抑制PHA活化的臍血CD4+T淋巴細胞的增殖，能夠改變調(diào)節(jié)性T細胞亞群的比率。表明臍帶間充質(zhì)干細胞對臍血CD4+T細胞介導(dǎo)的免疫反應(yīng)具有負調(diào)節(jié)作用。
　　最后部分是研究臍帶間充質(zhì)干細胞對異源臍血CD4+T淋巴細胞凋亡的調(diào)控作用。建立臍帶間充質(zhì)干細胞與地塞米松刺激的臍血CD4+T淋巴細胞直接接觸與Transwell共培養(yǎng)體系，流式檢測CD4+T淋巴細胞凋亡情況。
　　研究顯示臍帶MSCs明顯抑制了地塞米松誘導(dǎo)的臍血CD4+T淋