臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞聯(lián)合臍血干細(xì)胞治療Ⅰ型糖尿病的初步研究.pdf_第1頁(yè)
已閱讀1頁(yè),還剩72頁(yè)未讀 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶(hù)提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

1、目的:建立一種簡(jiǎn)便、高效臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分離方法。 方法:臍帶組織剔除血管后,余下的組織用不同酶混合液消化,消化后的細(xì)胞懸液培養(yǎng)在含10ng/mlbFGF和10%FBS的DMEM/F12培養(yǎng)基中,粘附層細(xì)胞用胰酶消化傳代培養(yǎng)。通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)及免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測(cè)細(xì)胞的免疫表型,在標(biāo)準(zhǔn)的成骨成脂誘導(dǎo)分化條件下檢測(cè)細(xì)胞的分化潛能。 結(jié)果:臍帶組織應(yīng)用中性蛋白酶、膠原酶Ⅰ和透明質(zhì)酸酶混合液消化后,每5cm長(zhǎng)度的臍帶可分離1×1

2、06單個(gè)核細(xì)胞,培養(yǎng)10天后可得2.2×106細(xì)胞。傳代培養(yǎng)后,細(xì)胞為均一的成纖維樣長(zhǎng)梭形。應(yīng)用此種方法在分離難度、細(xì)胞得率等方面明顯優(yōu)于其它酶或酶混合液消化方法。分離培養(yǎng)后的細(xì)胞,倍增時(shí)間為(34±4)h,表達(dá)與骨髓間質(zhì)細(xì)胞一致的表面標(biāo)志(CD29、CD90、vimentin、SMA、desmin),不表達(dá)造血和內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志(CD34、CD45、CD31、KDR),并表達(dá)多能干細(xì)胞標(biāo)志(SSEA4、OCT-4),同時(shí)具有向成骨、成脂細(xì)

3、胞分化的能力。 結(jié)論:應(yīng)用三種酶的混合液消化間質(zhì)組織分離臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞,操作簡(jiǎn)便,分離過(guò)程中,保持了細(xì)胞活力,細(xì)胞產(chǎn)量高,可以為臨床應(yīng)用提供大量高質(zhì)量種子細(xì)胞。 目的:探討臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞能否在體外向胰島素分泌細(xì)胞分化。 方法:用含β-巰基乙醇、表皮生長(zhǎng)因子、堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、B27及尼克酰胺的高糖DMEM培養(yǎng)基誘導(dǎo)臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞向胰島素分泌細(xì)胞分化。相差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化;誘導(dǎo)階段采用流式術(shù)檢測(cè)

4、PDX-1的表達(dá);誘導(dǎo)后采用免疫化學(xué)染色檢測(cè)胰島素和C肽的表達(dá):化學(xué)發(fā)光法測(cè)定低糖/高糖刺激下胰島素的分泌情況;RT-PCR檢測(cè)胰腺相關(guān)基因的表達(dá),如Ngn3、insulin、glucagon和somatostatin的表達(dá)。 結(jié)果:誘導(dǎo)后細(xì)胞形態(tài)由長(zhǎng)梭形逐漸變圓而且聚集成團(tuán),誘導(dǎo)第二階段表達(dá)PDX-1,誘導(dǎo)第三階段后細(xì)胞免疫化學(xué)染色表達(dá)胰島素和C肽,誘導(dǎo)組細(xì)胞經(jīng)高糖刺激后釋放胰島素,RT-PCR可檢測(cè)到insulin、Gluc

5、agon、Somatostatin、ngn3等胰島相關(guān)基因。 結(jié)論:人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞在特定的條件下可誘導(dǎo)分化為具有分泌胰島素功能的胰島樣細(xì)胞。 目的:觀察hUCMSCs聯(lián)合臍血干細(xì)胞在Ⅰ型糖尿病治療中的作用。 方法:連續(xù)小劑量腹腔注射鏈脲佐菌素(STZ)給C57/BL6雄鼠,觀察血糖濃度與糖耐量水平,建立Ⅰ型糖尿病小鼠模型。建模后,將hUCMSCs與臍血干細(xì)胞按不同比例,細(xì)胞總數(shù)量2×106細(xì)胞,通過(guò)尾靜脈移植

6、給受亞致死劑量(300cGy)照射后小鼠,觀察血糖變化。移植后28天,胰腺組織切片行人源胰島素免疫化學(xué)染色檢測(cè)植入細(xì)胞是否分化為胰島素分泌細(xì)胞,HE染色和小鼠胰島素免疫化學(xué)染色檢測(cè)受損的胰島是否得到修復(fù)。為了解植入細(xì)胞在組織中的定位,免疫化學(xué)染色法檢測(cè)腎臟及胰腺組織切片中的人核抗原,抽提腎臟及胰腺DNA經(jīng)PCR方法檢測(cè)人特異性Alu基因。 結(jié)果:注射STZ后7天,兩次隨機(jī)血糖大于16mmol/L的小鼠為Ⅰ型糖尿病小鼠。將hUCM

7、SCs與臍血干細(xì)胞按1:4比例移植入糖尿病小鼠體內(nèi),能明顯地改善胰島的結(jié)構(gòu)和功能,小鼠血糖水平明顯降低,胰島素分泌細(xì)胞的數(shù)量增加。然而在移植小鼠的胰腺?zèng)]有檢測(cè)到人胰島素分泌細(xì)胞和人核抗原。進(jìn)一步,通過(guò)檢測(cè)人特異性Alu基因,分析了移植小鼠胰腺和腎臟組織中是否存在移植細(xì)胞。結(jié)果顯示,在部分移植小鼠體內(nèi)存在人特異性Alu基因DNA,提示移植細(xì)胞在糖尿病小鼠胰腺和腎臟組織中存在。 結(jié)論:hUCMSCs聯(lián)合臍血干細(xì)胞移植后可定位于Ⅰ型糖

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶(hù)所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶(hù)上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶(hù)上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶(hù)因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論