腎纖康通過(guò)Wnt-β-catenin信號(hào)通路調(diào)控TGF-β1誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的研究.pdf

1、目的：探討中藥腎纖康基于Wnt/β-catenin信號(hào)通路對(duì)TGF-β1(transforminggrowth factor beta1，TGF-β1)誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的作用及機(jī)制。
　　方法：選用為正常大鼠近端腎小管上皮細(xì)胞(NRK-52E)，離體培養(yǎng)并采用隨機(jī)數(shù)字法將細(xì)胞分為5個(gè)組:對(duì)照組（C組）:在培養(yǎng)基中加入10％正常大鼠血清;TGF-β1組（T組）:在培養(yǎng)基中加入10％正常大鼠血清+TGF-β1（10ng/ml

2、）;腎纖康低濃度組（L組）:在培養(yǎng)基中加入5％中藥大鼠血清+5％正常大鼠血清+TGF-β1（10ng/ml）;腎纖康高濃度組（H組）:在培養(yǎng)基中加入10％中藥大鼠血清+TGF-β1（10ng/ml）;貝那普利陽(yáng)性對(duì)照組（B組）:在培養(yǎng)基中加入10％西藥大鼠血清+TGF-β1(10ng/ml)。藥物作用72小時(shí)后，運(yùn)用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化，細(xì)胞免疫熒光法、實(shí)時(shí)熒光定量PCR法(Q-PCR)、Western-blot檢測(cè)各組細(xì)胞a-平

3、滑肌肌動(dòng)蛋白（a-smooth muscle actin，α-SMA）、E-鈣粘素(E-cadherin)、β-連環(huán)蛋白(β-catenin)、Wnt4的表達(dá)。使用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS19.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果：⑴C組細(xì)胞形態(tài)為典型多邊形、卵圓形的鋪路石樣特征;T組細(xì)胞形態(tài)拉長(zhǎng)成為梭形，向肌成纖維細(xì)胞方向轉(zhuǎn)化;L組大部分細(xì)胞形態(tài)為梭形;H、B組細(xì)胞僅部分形態(tài)為梭形，大部分細(xì)胞外觀為多邊形、卵圓形鋪路石樣。⑵C組細(xì)胞胞質(zhì)中未

4、見(jiàn)α-SMA表達(dá)，胞核中無(wú)β-catenin陽(yáng)性表達(dá)，Wnt4胞膜上少量表達(dá)，胞質(zhì)中大量表達(dá)E-cadherin，T組與C組比較α-SMA、β-catenin以及Wnt4的表達(dá)增加(P＜0.05)，E-cadherin表達(dá)減少(P＜0.05);H組、B組及L組與T組比較α-SMA、β-catenin以及Wnt4的表達(dá)減少(P＜0.05)，E-cadherin的表達(dá)增加(P＜0.05);H組、B組較L組α-SMA、β-catenin、Wn

5、t4表達(dá)減少和E-cadherin表達(dá)增加更為顯著(P＜0.05);B組與H組比較α-SMA、β-catenin、Wnt4、E-cadherin表達(dá)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。⑶C組細(xì)胞中α-SMA、β-catenin、Wnt4 mRNA少量表達(dá)，E-cadherinmRNA大量表達(dá)。T組較C組α-SMA、β-catenin、Wnt4 mRNA表達(dá)明顯上調(diào)(P＜0.05)，E-cadherin mRNA表達(dá)明顯下調(diào)(P＜0.05

6、)。L、H、B組較T組α-SMA、β-catenin、Wnt4 mRNA表達(dá)均下調(diào)(P＜0.05)，E-cadherin mRNA表達(dá)均上調(diào)(P＜0.05);H組、B組較L組α-SMA、β-catenin、Wnt4 mRNA表達(dá)下調(diào)(P＜0.05)，E-cadherin mRNA表達(dá)上(P＜0.05)，B組與H組比較各指標(biāo)mRNA的表達(dá)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。⑷C組細(xì)胞中α-SMA、β-catenin、Wnt4蛋白少量表達(dá)，

7、E-cadherin蛋白大量表達(dá)。T組較C組α-SMA、β-catenin、Wnt4的蛋白表達(dá)上調(diào)(P＜0.05)，E-cadherin蛋白表達(dá)下調(diào)(P＜0.05)。L、H、B組較T組α-SMA、β-catenin、Wnt4蛋白表達(dá)均下調(diào)(P＜0.05)，E-cadherin蛋白表達(dá)均上調(diào)(P＜0.05)，H、B組與L組比較α-SMA、β-catenin、Wnt4蛋白表達(dá)均下調(diào)(P＜0.05)，E-cadherin蛋白表達(dá)均上調(diào)(P＜0

8、.05)，H組與B組比較各指標(biāo)蛋白表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論：①TGF-β1可以誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)化為肌成纖維細(xì)胞，增加α-SMA的表達(dá)而減少E-cadherin的表達(dá)，使Wnt4和β-catenin的表達(dá)上調(diào)，激活Wnt/β-catenin信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。②中藥腎纖康能夠抑制TGF-β1誘導(dǎo)的NRK-52E細(xì)胞轉(zhuǎn)分化，其抑制細(xì)胞轉(zhuǎn)分化的機(jī)制可能與其降低Wnt4和β-catenin的表達(dá)從而阻斷Wnt/β-c