SP01水包油佐劑的制備及安全性、有效性研究.pdf

1、目的：
　　隨著生物科學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展及各種新型疫苗研發(fā)的加速，人類對新型疫苗制劑的要求越來越嚴(yán)格。目前亞單位疫苗的免疫原性普遍較弱，為了提高疫苗的免疫原性，常在病毒性疫苗和多肽疫苗的研制中加入免疫佐劑，以增強(qiáng)疫苗對機(jī)體的免疫效力。佐劑是一類可以增強(qiáng)或改變機(jī)體對抗原產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答的物質(zhì)，其本身無或低免疫原性，不會或較小的引起機(jī)體免疫應(yīng)答，并且佐劑能夠有效降低疫苗產(chǎn)品中所含抗原成分或劑量，同時能夠?qū)w液、細(xì)胞免疫系統(tǒng)發(fā)揮有效的免

2、疫激活作用，誘導(dǎo)更強(qiáng)的保護(hù)性反應(yīng)，從而提高疫苗的有效性。
　　本研究自主研制水包油佐劑SP01，并對其理化性質(zhì)進(jìn)行檢測；依據(jù)《生物制品規(guī)程》要求，對其安全藥理、急性毒性、過敏反應(yīng)、溶血性、局部刺激性、長期毒性及致突變、致畸形、致癌性進(jìn)行評價；并進(jìn)一步與金黃色葡萄球菌滅活疫苗結(jié)合免疫BALB/C小鼠，檢測疫苗對機(jī)體免疫應(yīng)答效應(yīng)，同時以金黃色葡萄球菌攻毒小鼠，觀察SP01水包油佐劑對疫苗提高機(jī)體保護(hù)作用的影響，進(jìn)而為今后新型佐劑的研制

3、提供新的思路。
　　方法本研究分為三部分：
　?。ㄒ唬㏒P01水包油佐劑制備及檢定：將角鯊烯、聚氧乙烯蓖麻油、聚醚，磷酸鹽緩沖鹽水按照一定比例混合，應(yīng)用高剪切分散乳化機(jī)，乳化得到乳白色均一液體，根據(jù)《佐劑質(zhì)量評價標(biāo)準(zhǔn)》對佐劑外觀、粒徑、均一度、形態(tài)電鏡觀察、無菌、支原體、熱源質(zhì)等指標(biāo)進(jìn)行檢測。
　　（二）SP01水包油佐劑安全性評價：根據(jù)《生物制品規(guī)程》，通過對SP01水包油佐劑的安全藥理、急性毒性、過敏反應(yīng)、溶血性、

4、局部刺激性、長期毒性及致突變、致畸形、致癌性的檢測，對SP01水包油佐劑的安全性進(jìn)行全面的評價。
　?。ㄈ㏒P01水包油佐劑免疫效能的研究：應(yīng)用金黃色葡萄球菌滅活疫苗佐以SP01水包油佐劑，腹腔注射、肌肉注射、皮下注射等免疫方式對BALB/C小鼠進(jìn)行免疫，通過對小鼠機(jī)體免疫應(yīng)答效果及體外殺菌效果的檢測，評價SP01水包油佐劑的作用。
　　結(jié)果：
　　制備的SP01水包油佐劑為乳白色均一液體，pH值為7.0，粘度為1.

5、7，粒徑為125.12nm，均一度為98％，透射電鏡下呈圓球形，大小均一，粒徑均勻。穩(wěn)定性良好，無細(xì)菌、支原體生長，無熱源質(zhì)。在SP01水包油佐劑的安全性研究中，給予小鼠100μl、200μl、300μl、400μl SP01水包油佐劑靜脈注射，小鼠全部存活，自主活動數(shù)無明顯減少，且無劑量依賴性；SP01水包油佐劑500μl肌肉及靜脈注射小鼠4小時內(nèi)，其生理反應(yīng)無明顯變化，連續(xù)觀察14天，小鼠的體重明顯增加，各組織器官無病理變化；500

6、μl SP01水包油佐劑靜脈注射豚鼠未見過敏癥狀；SP01水包油佐劑對2%兔紅細(xì)胞無溶血作用，不引起紅細(xì)胞凝聚；日本大白兔耳緣靜脈連續(xù)5天注射500μl SP01水包油佐劑，耳緣靜脈切片顯示無血栓形成，無內(nèi)皮損傷及血管刺激性反應(yīng)；SP01水包油佐劑連續(xù)1個月肌肉注射大鼠，大鼠體重未見明顯下降，精神、食欲正常；小鼠肌肉注射500μl SP01水包油佐劑14天，注射部位組織病理切片無異常改變，無畸形，未見瘤變。由此證明：SP01水包油佐劑是

7、安全的，無急性毒性、過敏反應(yīng)、溶血、局部刺激、長期毒性及致突變、致畸形、致癌等不良發(fā)應(yīng)。
　　SP01水包油佐劑提高了對金黃色葡萄球菌滅活疫苗的體液免疫效果，其表現(xiàn)為總IgG明顯升高；抗體亞型顯示，SP01水包油佐劑促進(jìn)疫苗誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生體液免疫應(yīng)答效應(yīng)；增強(qiáng)了體外殺菌率。上述結(jié)果顯示，SP01水包油佐劑的使用，可以促進(jìn)疫苗對機(jī)體產(chǎn)生更強(qiáng)的體液免疫應(yīng)答效果。在攻毒后，小鼠體重及死亡率變化顯示，SP01水包油佐劑對于細(xì)菌疫苗具有良好的