SP01水包油佐劑的制備及安全性、有效性研究.pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的:
  隨著生物科學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展及各種新型疫苗研發(fā)的加速,人類對(duì)新型疫苗制劑的要求越來(lái)越嚴(yán)格。目前亞單位疫苗的免疫原性普遍較弱,為了提高疫苗的免疫原性,常在病毒性疫苗和多肽疫苗的研制中加入免疫佐劑,以增強(qiáng)疫苗對(duì)機(jī)體的免疫效力。佐劑是一類可以增強(qiáng)或改變機(jī)體對(duì)抗原產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答的物質(zhì),其本身無(wú)或低免疫原性,不會(huì)或較小的引起機(jī)體免疫應(yīng)答,并且佐劑能夠有效降低疫苗產(chǎn)品中所含抗原成分或劑量,同時(shí)能夠?qū)w液、細(xì)胞免疫系統(tǒng)發(fā)揮有效的免

2、疫激活作用,誘導(dǎo)更強(qiáng)的保護(hù)性反應(yīng),從而提高疫苗的有效性。
  本研究自主研制水包油佐劑SP01,并對(duì)其理化性質(zhì)進(jìn)行檢測(cè);依據(jù)《生物制品規(guī)程》要求,對(duì)其安全藥理、急性毒性、過(guò)敏反應(yīng)、溶血性、局部刺激性、長(zhǎng)期毒性及致突變、致畸形、致癌性進(jìn)行評(píng)價(jià);并進(jìn)一步與金黃色葡萄球菌滅活疫苗結(jié)合免疫BALB/C小鼠,檢測(cè)疫苗對(duì)機(jī)體免疫應(yīng)答效應(yīng),同時(shí)以金黃色葡萄球菌攻毒小鼠,觀察SP01水包油佐劑對(duì)疫苗提高機(jī)體保護(hù)作用的影響,進(jìn)而為今后新型佐劑的研制

3、提供新的思路。
  方法本研究分為三部分:
 ?。ㄒ唬㏒P01水包油佐劑制備及檢定:將角鯊烯、聚氧乙烯蓖麻油、聚醚,磷酸鹽緩沖鹽水按照一定比例混合,應(yīng)用高剪切分散乳化機(jī),乳化得到乳白色均一液體,根據(jù)《佐劑質(zhì)量評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)》對(duì)佐劑外觀、粒徑、均一度、形態(tài)電鏡觀察、無(wú)菌、支原體、熱源質(zhì)等指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)。
 ?。ǘ㏒P01水包油佐劑安全性評(píng)價(jià):根據(jù)《生物制品規(guī)程》,通過(guò)對(duì)SP01水包油佐劑的安全藥理、急性毒性、過(guò)敏反應(yīng)、溶血性、

4、局部刺激性、長(zhǎng)期毒性及致突變、致畸形、致癌性的檢測(cè),對(duì)SP01水包油佐劑的安全性進(jìn)行全面的評(píng)價(jià)。
 ?。ㄈ㏒P01水包油佐劑免疫效能的研究:應(yīng)用金黃色葡萄球菌滅活疫苗佐以SP01水包油佐劑,腹腔注射、肌肉注射、皮下注射等免疫方式對(duì)BALB/C小鼠進(jìn)行免疫,通過(guò)對(duì)小鼠機(jī)體免疫應(yīng)答效果及體外殺菌效果的檢測(cè),評(píng)價(jià)SP01水包油佐劑的作用。
  結(jié)果:
  制備的SP01水包油佐劑為乳白色均一液體,pH值為7.0,粘度為1.

5、7,粒徑為125.12nm,均一度為98%,透射電鏡下呈圓球形,大小均一,粒徑均勻。穩(wěn)定性良好,無(wú)細(xì)菌、支原體生長(zhǎng),無(wú)熱源質(zhì)。在SP01水包油佐劑的安全性研究中,給予小鼠100μl、200μl、300μl、400μl SP01水包油佐劑靜脈注射,小鼠全部存活,自主活動(dòng)數(shù)無(wú)明顯減少,且無(wú)劑量依賴性;SP01水包油佐劑500μl肌肉及靜脈注射小鼠4小時(shí)內(nèi),其生理反應(yīng)無(wú)明顯變化,連續(xù)觀察14天,小鼠的體重明顯增加,各組織器官無(wú)病理變化;500

6、μl SP01水包油佐劑靜脈注射豚鼠未見(jiàn)過(guò)敏癥狀;SP01水包油佐劑對(duì)2%兔紅細(xì)胞無(wú)溶血作用,不引起紅細(xì)胞凝聚;日本大白兔耳緣靜脈連續(xù)5天注射500μl SP01水包油佐劑,耳緣靜脈切片顯示無(wú)血栓形成,無(wú)內(nèi)皮損傷及血管刺激性反應(yīng);SP01水包油佐劑連續(xù)1個(gè)月肌肉注射大鼠,大鼠體重未見(jiàn)明顯下降,精神、食欲正常;小鼠肌肉注射500μl SP01水包油佐劑14天,注射部位組織病理切片無(wú)異常改變,無(wú)畸形,未見(jiàn)瘤變。由此證明:SP01水包油佐劑是

7、安全的,無(wú)急性毒性、過(guò)敏反應(yīng)、溶血、局部刺激、長(zhǎng)期毒性及致突變、致畸形、致癌等不良發(fā)應(yīng)。
  SP01水包油佐劑提高了對(duì)金黃色葡萄球菌滅活疫苗的體液免疫效果,其表現(xiàn)為總IgG明顯升高;抗體亞型顯示,SP01水包油佐劑促進(jìn)疫苗誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生體液免疫應(yīng)答效應(yīng);增強(qiáng)了體外殺菌率。上述結(jié)果顯示,SP01水包油佐劑的使用,可以促進(jìn)疫苗對(duì)機(jī)體產(chǎn)生更強(qiáng)的體液免疫應(yīng)答效果。在攻毒后,小鼠體重及死亡率變化顯示,SP01水包油佐劑對(duì)于細(xì)菌疫苗具有良好的

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