喹賽多在蛋雞的有效性與安全性研究.pdf

1、本試驗通過動物飼養(yǎng)試驗考察喹賽多對蛋雞的生產(chǎn)性能以及蛋品質(zhì)的影響，確定喹賽多在蛋雞的最佳作用劑量和時程；建立雞蛋中喹賽多及其兩種主要代謝產(chǎn)物脫二氧喹賽多和喹噁啉-2-羧酸的高效液相色譜檢測方法，考察三種化合物在雞蛋和蛋雞組織中的殘留消除規(guī)律；并結(jié)合喹賽多對蛋雞常見細(xì)菌的體外抑菌試驗等指標(biāo)來評價喹賽多對靶動物的有效性與安全性，從而為喹賽多在臨床上的合理應(yīng)用提供理論依據(jù)和技術(shù)支持。 1.喹賽多對蛋雞常見病原菌的體外抑菌活性研究。

2、 采用微量稀釋法測定喹賽多對蛋雞4種14株常見病原菌的體外抗菌活性。喹賽多對雞革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌均有較強的抑菌活性，對雞白痢沙門氏菌和雞大腸桿菌抑菌活性最強，其最小抑菌濃度(MIC)分別為4和16μg/mL，低于鹽酸金霉素和桿菌肽鋅。喹賽多對巴氏桿菌的抑菌效果比鹽酸金霉素差；對金黃色葡萄球菌的抑菌效果與鹽酸金霉素一樣。結(jié)果表明，喹賽多抑菌活性與鹽酸金霉素相近，比桿菌肽鋅強，提示喹賽多可作為活性較強的抑菌劑使用。 2.

3、喹賽多對蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)和血液生理生化指標(biāo)的影響。 1260羽商品代尼克珊瑚粉蛋雞隨機分為7組，每組3個重復(fù)，每個重復(fù)60羽。對照組飼喂基礎(chǔ)日糧(不添加任何抗菌藥物)，桿菌肽鋅組在基礎(chǔ)日糧上添加50mg/kg桿菌肽鋅，5個喹賽多組分別在基礎(chǔ)日糧上添加25、50、100、200和500mg/kg喹賽多。預(yù)試7d后轉(zhuǎn)入正式試驗，試驗期90d。試驗期間，每日記錄各重復(fù)組的產(chǎn)蛋數(shù)、破軟蛋個數(shù)、死淘情況，稱取每個重復(fù)組的蛋重，每周計算

4、耗料量、產(chǎn)蛋量、產(chǎn)蛋率、平均日采食量、平均蚩重、料蛋比、死淘翠和破蛋率。在試驗開始、第7周和第12周從每組隨機取30枚蛋(每重復(fù)10枚)，測定蛋重、比重、蛋殼厚度、蛋形指數(shù)及哈氏單位。存試驗開始和結(jié)束時.從每組隨機取10羽雞。翼下靜脈采血，測定血液生理生化指標(biāo)。取試驗期病死雞的心、肝、脾、腎、肺、卵巢及其它肉眼可見病變組織，進行病理組織學(xué)檢查。 喹賽多對生產(chǎn)性能的影響：試驗期間(33～44wk)，喹賽多各劑量組對生產(chǎn)性能均有不同

5、程度的影響。①產(chǎn)蛋率：各組中100mg/kg喹賽多組和桿菌肽鋅組表現(xiàn)出最高的產(chǎn)蛋率(91.95％VS91.56％)，比對照組分別提高2.42％和2.05％。高劑量喹賽多組(200mg/kg、500mg/kg)產(chǎn)蛋率比對照組分別降低1.09％和3.37％，對產(chǎn)蛋率表現(xiàn)出負(fù)效應(yīng)；②蛋重：各組中l(wèi)OOmg/kg喹賽多組和桿菌肽鋅組表現(xiàn)出最高的蛋重(60.89VS60.74)，比對照組分別提高1.37％和1.12％。高劑量喹賽多組(500mg/

6、kg)蛋重比對照組降低0.30％，對蛋重表現(xiàn)出負(fù)效應(yīng)；③料蛋比：各組中100mg/kg喹賽多組和桿菌肽鋅組表現(xiàn)出最低的料蛋比(1.83VS1.81)，比對照組均降低7.11％。高劑量喹賽多組(200mg/kg)料蛋比比對照組提高2.54％，對料蛋比表現(xiàn)出負(fù)效應(yīng)。這些結(jié)果表明，在33～44wk，蛋雞同糧中添加100mg/kg喹賽多，可提高產(chǎn)蛋高峰期蛋雞的產(chǎn)蛋率，增加產(chǎn)蛋量及蛋重，改善飼料報酬，且100mg/kg喹賽多效果與桿菌肽鋅效果相當(dāng)

7、，而高劑量喹賽多有降低生產(chǎn)性能的趨勢。因此，喹賽多在蛋雞日糧中適宜添加量100mg/kg，最佳添加時間為90d。 喹賽多對蛋品質(zhì)的影響：試驗期間，25mg/kg～100mg/kg喹賽多組可顯著改善蛋品質(zhì)。在試驗中期(39wk)，25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg、500mg/kg喹賽多組可使蛋殼厚度比對照組分別提高5.26％、5.26％、5.26％(P<0.01)和2.70％(P<0.05)，比桿菌肽鋅組分別提高5

8、.26％、5.26％、5.26％(P<0.01)、2.70％(P<0.05)。100mg/kg、200mg/kg喹賽多組哈夫單位比對照組分別顯著提高9.73％和9.16％(P<0.05)，且比桿菌肽鋅組分別顯著提高8.60％和8.02％(P<0.05)。在試驗后期(44wk)，50mg/kg、100mg/kg喹賽多組可使蛋殼厚度比對照組分別提高2.78％、5.41％，但差異不顯著。哈夫單位比對照組分別提高1.41％和2.66％，但差異不

9、顯著。喹賽多對蛋重、比重和蛋形指數(shù)無明顯影響(P>0.05)。結(jié)果表明，日糧中添加25mg/kg～100mg/kg喹賽多可有效提高蛋殼厚度和哈夫單位。 喹賽多對血液生理生化指標(biāo)的影響：25mg/kg、50mg/kg和100mg/kg喹賽多組的紅細(xì)胞數(shù)量和紅細(xì)胞壓積高于對照組(P>0.05)和500mg/kg喹賽多組(P<0.05)。100mg/kg喹賽多組的血糖高于對照組(P<0.05)和500mg/kg喹賽多組(P<0.01)

10、。500mg/kg喹賽多組的血清Na+濃度顯著低于對照組(P<0.05)。其它血清生化指標(biāo)各組間無顯著差異。試驗期間，試驗雞各生理生化指標(biāo)均在正常生理指標(biāo)參考范圍內(nèi)，說明喹賽多長期飼喂對蛋雞無明顯不良反應(yīng)。 喹賽多對組織病理學(xué)的影響：病理學(xué)檢查心臟、肝臟、脾臟、腎臟、肺臟和卵巢，未見有毒理學(xué)意義的改變，表明喹賽多對蛋雞無明顯不良影響。 3.喹賽多在雞蛋和蛋雞可食性組織中的殘留消除研究。 定量分析方法：按照國際生物

11、樣品中藥物定量分析方法的要求，建立了雞蛋中喹賽多、脫二氧喹賽多及喹嗯啉-2-羧酸殘留檢測的高效液相色譜(HPLC)方法。雞蛋樣品酸化后，再用乙腈/氯仿(1:4，v/v)混合液提取，正己烷去脂，用HPLC測定。喹賽多與脫二氧喹賽多色譜柱為AgilentTC-C18柱。流動相為乙腈-水，洗脫程序為：0min，乙腈20％，水80％；8min，乙腈20％，水80％；12min，乙腈25％，水75％；25min，乙腈25％，水75％。紫外檢測器波

12、長為305nm，流速為1.0mL/min。結(jié)果表明：喹賽多與脫二氧喹賽多在雞蛋中的最低定量限均為40μg/kg。喹賽多和脫二氧喹賽多標(biāo)準(zhǔn)工作液濃度在40μg/L～1600μg/L范圍內(nèi)，藥物峰面積與濃度呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)分別為rCYA=0.9996和rDEO-CYA=0.9996。添加濃度為40μg/kg、80μg/kg和160μg/kg時，喹賽多和脫二氧喹賽多在雞蛋中的回收率在68.32％～83.28％間，日間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在5

13、.64％～10.58％間。 雞蛋樣品在偏磷酸甲醇中水解，乙酸乙酯提取，磷酸鹽緩沖溶液反萃取，用OasisTMmax柱凈化，HPLC測定。喹噁啉-2-羧酸色譜柱為AgilentHC-C18柱。流動相為乙腈-1％甲酸水溶液(20:80；v/v)，流速為1.0mL/min。紫外檢測器檢測，檢測波長320nm。結(jié)果表明：喹嗯啉-2-羧酸在雞蛋中的最低定量限為4μg/kg。在20μg/L～800μg/L范圍內(nèi)，藥物峰面積與濃度呈良好的線性

14、關(guān)系(r=0.9996)。添加濃度為4μg/kg、8μg/kg和16μg/kg時，喹噁啉-2-羧酸在雞蛋中的回收率在69.14％～77.15％，日間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為7.33％～8.96％。 殘留消除研究：飼養(yǎng)試驗結(jié)束后，從100mg/kg喹賽多組中隨機選出50羽雞進行殘留消除研究，每天收集其中20羽雞所產(chǎn)的雞蛋，連續(xù)收集2周，用HPLC法檢測蛋中藥物殘留。另外30羽雞分別于停藥后12h、24h、2d、4d、6d隨即宰殺，取胸肌肉和

15、肝臟，測定組織中藥物殘留。結(jié)果表明：雞連續(xù)混飼100mg/kg喹賽多90d后，停藥0d所有雞蛋中均未檢出喹賽多、脫二氧喹賽多和喹噁啉-2-羧酸，肌肉組織中喹噁啉-2-羧酸濃度均在最低定量限(4μg/kg)以下，肝臟中QCA濃度為22.5～32.9μg/kg。但停約后6d即消除到最低定量限(10gg/kg)以下，其消除速率常數(shù)為0.52d-1，消除半衰期為1.3d。根據(jù)毒理學(xué)研究結(jié)果計算喹噁啉-2-羧酸在肝臟的MRL為900μg/kg，據(jù)