阻斷TGF-β通路雙位點抑制瘢痕相關(guān)蛋白生成研究.pdf

1、目的：研究可溶性TGF-β受體Ⅱ（sTβRⅡ，TGF-β受體Ⅱ胞外區(qū)）及突變型Smad4（Smad4△M4，野生型Smad4去除連接部位氨基酸序列）阻斷TGF-β/Smads通路雙位點較阻斷單一位點在抑制瘢痕相關(guān)蛋白生成方面的優(yōu)越性。
　　方法：構(gòu)建分別含sTβRⅡ和Smad4△M4序列的兩種慢病毒，并以不同感染復(fù)數(shù)(MOI)轉(zhuǎn)染人皮膚成纖維細(xì)胞(HFF-1)，篩選最適MOI值。將培養(yǎng)的HFF-1分為6組:共轉(zhuǎn)染組、sTβRⅡ組、

2、Smad4△M4組、陰性病毒對照組、陽性對照組及空白對照組。共轉(zhuǎn)染組為兩種病毒1∶1比例共轉(zhuǎn)染HFF-1;sTβRⅡ組及Smad4△M4組分別為單一病毒轉(zhuǎn)染HFF-1;陰性病毒對照組為空載體病毒轉(zhuǎn)染HFF-1，均采用TGF-β1刺激轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞。陽性對照組為單用TGF-β1刺激HFF-1;空白對照組為未作任何處理的HFF-1。采用Western Blot/qPCR法檢測各組纖連蛋白的相對表達(dá)量;ELISA法、Sircol膠原定量試劑金分

3、別檢測各組結(jié)締組織生長因子(CTGF)及總膠原蛋白表達(dá)量。采用SNK-q檢驗對各組數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。
　　結(jié)果：兩種慢病毒轉(zhuǎn)染HFF-1最適MOI均為50。相對于空白對照組，陽性對照組及陰性病毒對照組纖連蛋白、CTGF及膠原蛋白的表達(dá)量最高(P＜0.05)，但兩組間差異無統(tǒng)計意義(P＞0.05);sTβRⅡ組及Smad4△M4組表達(dá)量均低于陽性對照組及陰性病毒對照組(P＜0.05);共轉(zhuǎn)染組表達(dá)量更低(P＜0.05)。
　　結(jié)論