降血壓益生菌的篩選及其發(fā)酵特性的研究.pdf

1、益生菌在促進(jìn)人體健康和防止疾病發(fā)生中發(fā)揮著重要的作用。本論文從大量分離獲得的乳酸菌菌株中，篩選具有降壓特性的益生菌，并對(duì)其進(jìn)行鑒定，為研究和開(kāi)發(fā)具有降血壓功能的益生菌產(chǎn)品奠定基礎(chǔ)。 (1)利用改良MRS、NPNL、TPY培養(yǎng)基，從9種樣品中共分離到126株菌株，其中桿菌32株，球菌94株，通過(guò)形態(tài)觀察、生理生化試驗(yàn)、共獲得47株性能良好的產(chǎn)酸菌。 (2)對(duì)47株產(chǎn)酸菌進(jìn)行耐酸和膽汁鹽試驗(yàn)。有7株供試菌株能在pH2.0的0

2、.3％膽汁酸鹽中存活超過(guò)6h，并以菌株C3和W4的耐受性最強(qiáng)。 (3)對(duì)產(chǎn)酸菌進(jìn)行了體外抑菌試驗(yàn)。通過(guò)測(cè)定，抑菌圈直徑超過(guò)15mm的有2株，在12mm-15mm有7株，小于12mm有38株。其中菌株C3和W4的抑菌能力較對(duì)照菌株BB-12強(qiáng)。C3對(duì)埃希氏大腸桿菌和沙門(mén)氏菌的抑菌直徑分別為17.9±1.6mm、16.6±1.2mm；W4對(duì)埃希氏大腸桿菌和沙門(mén)氏菌的抑菌直徑分別為l 8.9±1.4 mm、17.9±1.6mm。

3、 (4)對(duì)產(chǎn)酸菌發(fā)酵乳的血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(Angiotensin I-Converting Enzyme，ACE)抑制率進(jìn)行測(cè)定后發(fā)現(xiàn)，有6株菌對(duì)ACE的抑制率超過(guò)50％，其中C3菌株對(duì)ACE的抑制率最高。 (5)對(duì)獲得的耐酸和耐膽汁鹽且具有較強(qiáng)的血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)抑制率的產(chǎn)酸菌C3和W4通過(guò)生理生化試驗(yàn)，結(jié)合API系列試劑條和16SrDNA序列同源性分析，其分別被鑒定為青春雙歧桿菌(Bifidobacterium．a(chǎn)

4、dolescentis)和屎腸球菌(Enterococcus．faecium)。 (6)對(duì)青春雙歧桿菌C3的發(fā)酵特性進(jìn)行了研究。通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)，隨著生物量的增加，發(fā)酵乳對(duì)ACE的抑制率也在增加，24h的發(fā)酵乳對(duì)ACE抑制率最大，為71.25％。隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，青春雙歧桿菌C3發(fā)酵乳的鄰苯二甲醛(O-phthalaIdehyde，OPA)指數(shù)有所增加，最高達(dá)0.43。 (7)對(duì)青春雙歧桿菌C3發(fā)酵乳血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制肽(A

5、CEIP)的相對(duì)分子質(zhì)量分布和ACE抑制率的關(guān)系進(jìn)行了研究。采用凝膠過(guò)濾色譜法檢測(cè)了青春雙歧桿菌C3發(fā)酵24h時(shí)血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制肽相對(duì)分子質(zhì)量分布范圍，結(jié)果表明，相對(duì)分子質(zhì)量分布在385Da～1782Da之間，其中相對(duì)分子質(zhì)量在408Da處出現(xiàn)的洗脫峰ACE抑制率最大，為84.07％。 (8)對(duì)青春雙歧桿菌C3發(fā)酵乳ACE抑制肽的分離制備工藝進(jìn)行了研究。結(jié)果是使用5K分子量的膜的超濾最佳條件為為：室溫(30℃)、操作壓力0.

6、1Mpa，不需調(diào)節(jié)pH值。獲得的超濾液的ACE抑制率比母液提高了19.47％；在凝膠過(guò)濾中，分別采用Sephadex G-25和Sephadex G-15對(duì)發(fā)酵乳清進(jìn)行分離，其中Sephadex G-25可以分離出3個(gè)活性組分，這3個(gè)組分中以組分2和組分3的ACE抑制率最高(p<0.0 1)，其ACEIP的相對(duì)分子質(zhì)量主要分布在1700Da以下；組分2和3濃縮后上Sephadex G-15分離后的結(jié)果與葡聚糖凝膠G-25分離圖譜是一致的

7、；比較SephadexG-15分離圖譜與卡托普利標(biāo)準(zhǔn)品的SephadexG-15分離圖譜后發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵乳中ACEIP的分子量比卡托普利(217.29)標(biāo)準(zhǔn)品的分子量要大。 (9)對(duì)發(fā)酵乳ACE抑制率的穩(wěn)定性進(jìn)行了研究。結(jié)果顯示，發(fā)酵乳在4℃冰箱冷藏24h和冷藏48h后ACE抑制率分別降低了11.21％和19.28％；-20℃冷凍60天時(shí)ACE抑制率下降了1.7％；在90℃條件下加熱20min后，ACE抑制率僅降低了1.32％(p<