斑點(diǎn)叉尾鮰腸道益生菌的篩選與特性研究.pdf

1、由于濫用抗生素而導(dǎo)致的水產(chǎn)品中藥物殘留、水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物致病菌耐藥性的產(chǎn)生等問題己引起人們的廣泛關(guān)注。在水產(chǎn)養(yǎng)殖中尋找高效、安全、無殘留的漁藥替代品已迫在眉睫,益生菌就是一個(gè)有希望的替代品。本論文在對(duì)斑點(diǎn)叉尾鮰腸道內(nèi)需氧及兼性厭氧菌群進(jìn)行分離、鑒定的基礎(chǔ)上,利用菌株對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物常見病原菌的體外拮抗實(shí)驗(yàn)和產(chǎn)胞外酶能力等初步篩選了益生菌株；并對(duì)擬選菌株進(jìn)行培養(yǎng)條件的探討和培養(yǎng)基的優(yōu)化；獲得的主要結(jié)果如下:
　　 (1)對(duì)斑點(diǎn)叉尾鮰腸道需氧

2、及兼性厭氧菌群進(jìn)行了定量和定性分析。結(jié)果表明:斑點(diǎn)叉尾鮰前腸細(xì)菌總數(shù)為1.3×106cfu/g,中腸細(xì)菌總數(shù)為1.6×106cfu/g,后腸細(xì)菌總數(shù)為4.6×106cfu/g。從斑點(diǎn)叉尾鮰腸道中共檢測(cè)出陰溝腸桿菌、河流弧菌、類志賀鄰單胞菌、嗜麥芽窄食單胞菌、大腸埃希氏菌、溶藻弧菌、枯草芽孢桿菌、腐敗希瓦菌、殺鮭氣單胞菌殺日本鮭亞種、產(chǎn)吲哚金黃桿菌、植生拉烏爾特菌、鮑氏不動(dòng)桿菌、洋蔥伯克霍爾德菌、嗜水氣單胞菌、微球菌屬、布魯菌屬、氣單胞菌

3、屬、芽孢桿菌屬、棒桿菌屬、弧菌屬、歐文氏菌屬等21個(gè)種屬的細(xì)菌。
　　 (2)對(duì)患細(xì)菌性出血病斑點(diǎn)叉尾鮰與健康斑點(diǎn)叉尾鮰腸道需氧及兼性厭氧菌群進(jìn)行了比較。結(jié)果表明:患細(xì)菌性出血病斑點(diǎn)叉尾鮰腸道細(xì)菌總數(shù)少于健康斑點(diǎn)叉尾鮰,菌群的種類和各菌群所占的比率也存在較大差異。在正常斑點(diǎn)叉尾鮰腸道中共檢測(cè)到8種細(xì)菌,患細(xì)菌性出血病斑點(diǎn)叉尾鮰腸道中共檢測(cè)到4種,正常斑點(diǎn)叉尾鮰腸道中氣單胞菌所占比率為46.7％,腸桿菌科占26.4％,弧菌屬占13

4、.3％,芽孢桿菌屬占2.9％,不動(dòng)桿菌屬占1.9％,微球菌屬占1％,棒桿菌屬占1％,假單胞菌屬占1％,其他占5.7％?；技?xì)菌性出血病斑點(diǎn)叉尾鮰腸道中氣單胞菌占67.3％,弧菌屬占16.3％,腸桿菌科占10.2‰棒桿菌屬占1.0％,其他占5.1％。
　　 (3)從健康斑點(diǎn)叉尾鮰腸道中分離出342株菌株,通過對(duì)常見病原菌的體外拮抗實(shí)驗(yàn)和分泌胞外酶能力的研究表明:其中產(chǎn)淀粉酶的59株；產(chǎn)蛋白酶的62株；產(chǎn)脂肪酶的57株；產(chǎn)明膠液化酶的

5、76株。6株細(xì)菌能對(duì)常見水產(chǎn)動(dòng)物病原菌產(chǎn)生體外拮抗作用。綜合兩方面實(shí)驗(yàn),菌株BH0142、BH0124和BHI344比其他菌株更具有開發(fā)前景,但菌株BH0142對(duì)常用8種抗生素已經(jīng)產(chǎn)生了耐藥性,菌株BH0124經(jīng)鑒定為已知的水產(chǎn)動(dòng)物病原菌,最終選取BHI344做為益生菌開發(fā),經(jīng)鑒定為枯草芽孢桿菌。
　　 (4)通過培養(yǎng)條件和培養(yǎng)基優(yōu)化實(shí)驗(yàn),初步確定菌株BHI344達(dá)到最大活菌數(shù)的培養(yǎng)條件是:培養(yǎng)基初始pH值7.6,接種量5％(v