脂聯(lián)素表達(dá)與TNF-α關(guān)系的研究.pdf

1、研究目的和背景：代謝綜合征(metabolicsyndrome，MS)是由相互作用的內(nèi)臟型肥胖、異常的糖代謝、血脂紊亂、增高的血壓等所組成。這些組分均獨(dú)立地增加心血管疾病(cardiovasculardisease．CVD)的危險(xiǎn)，尤其是增加動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)疾病如缺血性心臟病和腦中風(fēng)的危險(xiǎn)。而MS的各個(gè)組分聯(lián)合起來還對(duì)心血管并發(fā)癥有協(xié)同作用。近年來人們一致認(rèn)為，胰島素抵抗(insulinresista

2、nce．IR)是連接MS與CVD之間關(guān)系的一個(gè)關(guān)鍵因素，并且發(fā)現(xiàn)，內(nèi)臟脂肪組織在IR過程中發(fā)揮了最重要的作用。脂肪組織是重要的內(nèi)分泌器官，可以分泌許多生物活性物質(zhì)，這些物質(zhì)共同被稱為脂肪因子。大量研究證實(shí)，內(nèi)臟脂肪組織中促炎脂肪因子和抗炎脂肪因子合成失調(diào)與IR有相關(guān)關(guān)系，而且對(duì)多種CVD的發(fā)病有明顯的促進(jìn)作用。而脂聯(lián)素是近年來發(fā)現(xiàn)的一種極為重要的脂肪因子，基本上只由脂肪細(xì)胞所分泌，具有抗炎和心血管保護(hù)特性。許多研究發(fā)現(xiàn)，在MS中該因子的

3、表達(dá)是下調(diào)的。然而，脂肪組織中脂聯(lián)素表達(dá)發(fā)生改變的機(jī)制還相當(dāng)不清楚． 近來研究證實(shí)肥胖者脂肪組織所具有的特征之一是滲透到其中的巨噬細(xì)胞量增多，該組織中rNF-o分泌旺盛，并且?guī)缀醵紒碜杂诰奘杉?xì)胞…。肥胖者體內(nèi)脂肪組織十分豐富，因此rNF-cl的表達(dá)量相當(dāng)大，一方面它進(jìn)入血液成為肥胖者循環(huán)中該因子的一個(gè)主要來源，對(duì)包括心血管在內(nèi)的其它器官系統(tǒng)產(chǎn)生不利影響；另一方面TNF-Q可以在脂肪組織局部發(fā)揮著致炎作用。已經(jīng)有文獻(xiàn)報(bào)道在某些病理

4、條件下巨噬細(xì)胞與其他類型的細(xì)胞之間的存在著局部相互作用，作為最重要的炎癥介質(zhì)之一，很多研究證實(shí)TNF-Q可以通過一系列特定的途徑對(duì)大量的細(xì)胞因子的表達(dá)有調(diào)節(jié)作用。作為近年發(fā)現(xiàn)的脂聯(lián)素，其在脂肪細(xì)胞中的表達(dá)是否會(huì)受到來自于巨噬細(xì)胞的TNF-Q影響?目前沒有明確的答案。因此，本課題立足于通過動(dòng)物試驗(yàn)檢測(cè)脂聯(lián)素的表達(dá)情況，分析其與TNF-Q的關(guān)系。另外通過脂肪細(xì)胞培養(yǎng)研究TNF-Q對(duì)脂聯(lián)素表達(dá)的影響。 研究方法：(1)將30只雄性SD

5、大鼠隨機(jī)分成對(duì)照組和高脂組，分別用普通飼料和高脂飼料飼養(yǎng)10周，在第10周時(shí)分別檢測(cè)兩組大鼠體重、體內(nèi)脂肪量、血清中血脂及炎癥因子TNF-(I水平，同時(shí)取大網(wǎng)膜脂肪組織作RT-PCR研究脂聯(lián)素mRNA的表達(dá)情況。(2)取雄性SD大鼠大網(wǎng)膜及雙側(cè)腎臟周圍脂肪組織，提取前脂肪細(xì)胞并進(jìn)行培養(yǎng)，經(jīng)誘導(dǎo)使其轉(zhuǎn)化為脂肪細(xì)胞，在細(xì)胞誘導(dǎo)分化后第8天分別以不同濃度的重組TNF-Q以及羅格列酮干預(yù)培養(yǎng)36小時(shí)，最后測(cè)量所培養(yǎng)的脂肪細(xì)胞中脂聯(lián)素mRNA表達(dá)

6、情況，并收集培養(yǎng)上清液測(cè)量脂聯(lián)素濃度。 結(jié)果：(1)與對(duì)照組比較，高脂組大鼠體重、附睪及腹膜后脂肪組織量均顯著上升；血清TG、TC及TNF-u,水平均顯著增高，高脂組大鼠脂肪組織脂聯(lián)素mRNA表達(dá)水平顯著低于對(duì)照組，且相關(guān)性分析顯示脂聯(lián)素mRNA表達(dá)與體重、腹膜后及附睪脂肪組織量、血清TG及TN-F-u,水平呈顯著的負(fù)相關(guān)關(guān)系；(2)TNF-o．對(duì)培養(yǎng)的脂肪細(xì)胞脂聯(lián)素表達(dá)的影響：分別以不同濃度的TNF-~作用于培養(yǎng)成熟脂肪細(xì)胞3

7、6小時(shí)后，脂聯(lián)素mRNA的表達(dá)水平均顯著低于對(duì)照組，同時(shí)培養(yǎng)上清液中脂聯(lián)素水平亦顯著低于對(duì)照組；并且TN~-ol,的作用濃度越大，脂肪細(xì)胞中脂聯(lián)素mRNA的表達(dá)水平及上清液中脂聯(lián)素濃度越低下；羅格列酮可以阻止TNF-o[,對(duì)脂聯(lián)素表達(dá)的抑制作用。 結(jié)論：高脂飲食誘導(dǎo)的肥胖大鼠脂肪組織中脂聯(lián)素mRNA表達(dá)水平下降，而循環(huán)中TNF-~的濃度上升，兩者之間存在著顯著的負(fù)相關(guān)關(guān)系；TN'F-o[能直接抑制脂肪細(xì)胞中脂聯(lián)素mRNA的表達(dá)，