腺病毒介導載脂A-I在LPS誘導的小鼠系統(tǒng)性炎癥和組織損傷中的保護作用.pdf

1、復旦大學博士研究生畢業(yè)論文腺病毒介導載脂蛋白A - I 在L P S 誘導的小鼠系統(tǒng)性炎癥和組織損傷中的保護作用H u m a n A p o A ·- Io v e r e x p r e s s i o nd i m i n i s h e s L P S ··i n d u c e ds y s t e m i c i n f l a m m a t i o na n dm u l t i p l e

2、o r g a n d a m a g e i nm i c e博士生姓名 李悅專 業(yè) 生物化學與分子生物學導 ! J 幣 吳滿平教授二零零八年四月復旦大學藥學院生物化學教研室，^．。，，鼙．．of?！闕’◆’i毋●●●復旦大學藥學院博士研究生畢業(yè)論文( 2 0 0 8 )摘 要本實驗以載脂蛋白A - I ( A p o l i p o p r o t c i n A - I ，A p o A —I ) 為研究目標，主要圍繞兩方面展開課

3、題：一、利用腺病毒基因表達系統(tǒng)建立人A p o A ．I 過表達小鼠模型：二、重點研究小鼠A p o A - I 過表達對內毒素( 1 i p o p o l y s a c h a r i d e ，L P S ) 誘導的系統(tǒng)性炎癥和組織損傷的保護作用。V 型腺病毒載體構建攜帶人A p o A ．I 基因的重組腺病毒( A d V - A I ) ，靜脈注射6 周齡B A L B ／c 小鼠，利用V 型腺病毒的親肝細胞性，使其攜帶的人

4、A p o A ．I 基因在小鼠肝臟富集表達；通過蛋白水平和m R N A 水平的檢測，確認人A p o A ．I的過表達，建立人A p o A ．I 小鼠肝臟過表達模型。利用該模型小鼠，觀察A p o A ．I 在L P S 誘導的小鼠系統(tǒng)性炎癥和組織損傷中的保護作用。分別檢測A p o A - I 高表達對小鼠血漿脂質水平( H D L - 膽固醇、總膽固醇及甘油三酯) 、H D L 顆粒的變化影響及對L P S 誘導小鼠系統(tǒng)性炎癥

5、一系列相關指標的影響，包括：l 、血清和肺灌洗液( B A L ) 中細胞因子T N F ．a ，I L ．6 ，I L - I p的水平；2 、肺和肝臟組織C D l 4 的表達水平；3 、血清中肌酸激酶( c r e a t m e k i n a s e ，C K ) 和肌酐( c r e a t i n i n e ，C l 也) 的水平；4 、腎臟和肺臟的組織病理學檢查。本實驗獲得如下結果：小鼠體內人A p o A ．I 過表

6、達導致小鼠體內若干指標出現(xiàn)以下變化：1 ．小鼠血清中人A p o A - I 水平顯著高表達( P < 0 ．0 1 ) ，但沒有引起小鼠自身血清A l m A ．I 濃度的變化；2 ．小鼠血清中總膽固醇、H D L 膽固醇和甘油三酯含量增加，其中總膽固醇增加8 4 ％( P < 0 ．0 1 ) ，H D L 膽固醇增加5 1 ％( P < 0 ．0 1 ) ，甘油三酯增加6 9 ％( 尸< 0 ．0 5 )

7、；3 ． 小鼠血清中出現(xiàn)新的人源化的H D L ；4 ．顯著降低L P S 炎癥小鼠血清和肺灌洗液中T N F 噸，I L ．6 ，I L - I p 的水平；5 ．顯著降低肺和肝臟組織L P S 誘導的C D l 4m R N A 表達( 尸< O ．0 1 。P <0 ．0 5 ) ：6 ．顯著抑制L P S 誘導的血清中C K 和C R E 的增加( P < 0 ．0 5 ) ；7 ．減輕L P S 誘導的腎臟和