柚皮素靶向let-7a-TGFBR1信號途徑延緩糖尿病腎損傷的研究.pdf

1、第一部分柚皮素延緩糖尿病腎病大鼠腎損傷的研究
　　目的：探討柚皮素對糖尿病腎病(Diabetic nephropathy，DN)大鼠腎臟保護作用。
　　方法：采用高糖高脂飲食聯(lián)合小劑量鏈脲佐菌素腹腔注射的方法建立 DN大鼠模型。將 DN模型大鼠隨機分為 DN組和柚皮素（Naringenin，NAR）組，按50 mg/kg劑量治療6周。檢測大鼠24h尿蛋白定量、肌酐清除率、腎臟指數(shù)；HE染色觀察腎組織形態(tài)學和檢測腎小球面積；R

2、eal time RT PCR法檢測Ⅳ型膠原（type4 collagen， Col4）和纖維連接蛋白（Fibronectin，F(xiàn)N）mRNA的表達；Western blot和免疫熒光檢測Col4和FN蛋白的表達。
　　結果：成功建立了DN大鼠模型。DN組大鼠較正常組大鼠24h尿蛋白顯著升高，肌酐清除率明顯下降，腎臟指數(shù)明顯增大，腎小球呈肥大狀態(tài)，同時Col4和FN的mRNA水平和蛋白表達量均升高；經(jīng)柚皮素治療后的 DN大鼠的24

3、h尿蛋白明顯降低，肌酐清除率升高，腎臟指數(shù)降低，腎小球肥大減輕，同時腎臟組織中Col4和FN的mRNA水平和蛋白表達量明顯降低。
　　結論：柚皮素通過調控糖尿病腎病大鼠腎組織中細胞外基質蛋白的合成，減輕腎臟病理損害，從而起到保護腎臟的作用。
　　第二部分柚皮素對高糖條件下系膜細胞增殖的調控作用
　　目的：探討柚皮素對高糖培養(yǎng)的腎小球系膜細胞增殖的調控作用。
　　方法： MTT法檢測不同濃度、不同時間下柚皮素對系膜

4、細胞生長的影響；流式細胞術檢測柚皮素對細胞周期的影響；Western blot和免疫熒光檢測細胞外基質相關蛋白Col4和FN表達水平。
　　結果：柚皮素抑制系膜細胞增殖的作用呈時間和劑量依賴性，并使系膜細胞生長停滯于 G2期，同時柚皮素抑制系膜細胞合成細胞外基質。
　　結論：柚皮素抑制腎小球系膜細胞增殖與合成細胞外基質。
　　目的：探討柚皮素延緩糖尿病腎損傷的作用機制。
　　方法： Real time RT PC

5、R檢測microRNA let-7a在糖尿病腎病大鼠和小鼠腎小球系膜細胞中的表達；雙熒光素酶報告系統(tǒng)和Western blot檢驗TGFBR1是否為let-7a的靶基因；Western blot檢測柚皮素和let-7a分別作用以及共同作用對細胞外基質相關蛋白和 TGF-β1/smad信號途徑相關蛋白表達水平的影響。
　　結果： let-7a在糖尿病腎病大鼠血液和組織以及高糖培養(yǎng)的小鼠系膜細胞中呈低表達狀態(tài)，經(jīng)柚皮素作用后 let-

6、7a表達上調；驗證了TGFBR1是 let-7a的一個靶基因；在組織和細胞中 TGF-β1、TGFBR1和磷酸化 smad2蛋白的表達量均升高，TGF-β1/smad信號途徑抑制因子smad7蛋白表達量降低，經(jīng)柚皮素治療后，TGF-β1、TGFBR1和磷酸化 smad2蛋白的表達量均降低，smad7蛋白表達量升高；同時，柚皮素通過上調 let-7a抑制 TGFBR1和磷酸化 smad2的表達以及抑制Col4和FN蛋白合成。
　　結