利拉魯肽抑制mTOR表達(dá)延緩糖尿病腎損傷的機(jī)制研究.pdf

1、糖尿病腎病(Diabetic Nephropathy，DN)是糖尿病最常見的慢性并發(fā)癥之一，微量白蛋白尿是其早期臨床表現(xiàn)，屬可逆性改變。DN病理改變包括腎小球肥大、細(xì)胞外基質(zhì)增多、腎小球硬化和間質(zhì)纖維化，糖代謝異常與DN發(fā)生密切相關(guān)，且近期有研究證實(shí)mTOR即哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白在DN發(fā)生中起重要作用。
　　胰升糖素樣肽1（glucagon-like peptide-1，GLP-1）作為新的降糖藥物，已用于2型糖尿?。╰ype2

2、 diabetes mellitus，T2DM）病人，證實(shí)能顯著降低糖尿病患者的血糖。但GLP-1應(yīng)用于糖尿病前期人群的研究相對(duì)較少，且近年來越來越多的研究開始關(guān)注GLP-1的降糖外療效，如對(duì)大血管及微血管的保護(hù)作用等。故本課題擬開展相關(guān)研究，觀察早期應(yīng)用GLP-1類似物—利拉魯肽是否能減少糖耐量受損(ImpairedGlucose Tolerance，IGT)大鼠的糖尿病發(fā)生率及是否能延緩其腎損傷。同時(shí)研究利拉魯肽是否能延緩T2DM大

3、鼠腎損傷及其機(jī)制，即證實(shí)利拉魯肽的腎保護(hù)作用是否與PI3K-AKT-mTOR通路相關(guān)。相信研究結(jié)果將為闡明利拉魯肽的腎保護(hù)作用機(jī)制，為利拉魯肽在糖尿病前期和糖尿病患者中的應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　目的：
　　1.研究利拉魯肽對(duì)IGT大鼠腎損傷的保護(hù)作用。
　　2.研究利拉魯肽對(duì)T2DM大鼠腎損傷的保護(hù)作用3.研究利拉魯肽延緩糖尿病腎損傷的可能機(jī)制。
　　方法：選擇4周齡的SD大鼠，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后隨機(jī)分為高脂飼料組

4、和普通飼料組。予高脂飼料喂養(yǎng)8周后，分別腹腔注射10mg/kg和20mg/kg的鏈脲佐菌素(streptozotocin，STZ)，構(gòu)建IGT大鼠及T2DM大鼠模型。建模成功后，IGT大鼠隨機(jī)分為IGT對(duì)照組、利拉魯肽治療組，并設(shè)立正常對(duì)照組;T2DM大鼠隨機(jī)分為糖尿病對(duì)照組，胰島素治療組和利拉魯肽治療組，同樣設(shè)立正常對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)期間每周檢測(cè)血糖和體重，高脂喂養(yǎng)8周、IGT大鼠干預(yù)5周和糖尿病干預(yù)5周后分別行口服葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn)(Oral

5、 glucose tolerance test，OGTT)以評(píng)估胰島功能情況，并測(cè)血脂、血尿素、血肌酐、胱抑素C和尿白蛋白/肌酐比值等指標(biāo);大鼠處死后留腎臟組織，行HE染色及電鏡檢測(cè)，觀察腎組織形態(tài)學(xué)改變;行Masson染色，觀察腎組織纖維化情況;免疫組化檢測(cè)大鼠腎組織轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（transforming growth factorβ1，TGFβ1）、結(jié)締組織生長(zhǎng)因子（connective tissue growth factor

6、，CTGF）和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）表達(dá)情況;Western Blot法檢測(cè)腎組織mTOR和P70S6k蛋白表達(dá)情況;實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄酶聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)法(Relative quantification in real time reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)檢測(cè)腎組織mTOR、CTG

7、F、VEGF和NOX-4 mRNA的表達(dá)情況。研究利拉魯肽早期干預(yù)是否能延緩糖尿病的發(fā)生及改善IGT大鼠的腎損傷;利拉魯肽是否通過抑制mTOR通路，延緩T2DM的腎損傷。
　　結(jié)果：
　　1.高脂喂養(yǎng)8周后，與普通飼料組大鼠比，高脂飼料組大鼠甘油三脂水平升高，體重及雙側(cè)附睪脂肪重量均明顯增高（均P＜0.01）;
　　2.與IGT對(duì)照組相比，利拉魯肽治療組大鼠體重、雙腎/體重比值、雙側(cè)附睪脂肪/體重比值、血糖、總膽固醇及

8、甘油三脂水平均明顯減低（均P＜0.05）;
　　3.與胰島素治療組相比，T2DM利拉魯肽治療組大鼠體重、雙腎/體重比值、雙側(cè)附睪脂肪/體重比值、血糖、總膽固醇、甘油三脂、低密度脂蛋白、胱抑素C及尿白蛋白/肌酐比值均明顯降低（均P＜0.05）;
　　4.T2DM大鼠腎小球肥大、系膜細(xì)胞明顯擴(kuò)張，且足細(xì)胞數(shù)量明顯減少;但利拉魯肽治療后腎小球肥大和系膜細(xì)胞擴(kuò)張情況明顯好轉(zhuǎn)，足細(xì)胞數(shù)量明顯增多;
　　5.免疫組化研究證實(shí)，與糖

9、尿病對(duì)照組及胰島素治療組相比，利拉魯肽治療組腎組織TGF-β1、CTGF及VEGF表達(dá)明顯減少;
　　6.與胰島素治療組相比，利拉魯肽治療組腎組織的p-mTOR和p-p70S6k蛋白的表達(dá)明顯減少，且腎組織CTGF、VEGF及NOX-4 mRNA的表達(dá)也明顯降低。
　　結(jié)論：糖耐量受損大鼠已出現(xiàn)輕度的腎臟病理學(xué)改變，而早期應(yīng)用利拉魯肽干預(yù)可延緩糖耐量受損大鼠進(jìn)展為糖尿病，并改善其腎損傷。研究發(fā)現(xiàn)利拉魯肽在降糖同時(shí)，可明顯改善