先天性中性粒細胞減少癥臨床特征、基因突變分析及乙肝病毒X蛋白對HEK293細胞的獨特作用研究.pdf

1、第一部分：先天性中性粒細胞缺陷病臨床表現(xiàn)特征及其基因突變分析
　　目的：通過對臨床上發(fā)現(xiàn)的粒細胞降低的病人在排除了后天因素后，進行對相關(guān)基因測序檢測相關(guān)基因來確診先天性中性粒細胞減少癥，從而進行指導患者的治療。
　　方法：利用血常規(guī)，骨髓穿刺染色，ANCA，提取患兒及其父母的核酸，對ELANE基因進行擴增，測定PCR產(chǎn)物，對ELANE基因突變分析及TA克隆后突變分析后確定診斷
　　結(jié)果：11例疑診患兒都有反復的感染（皮

2、膚軟組織，肺部，空腔等），非感染性癥狀有貧血等。ELANE基因突變病人9例，CD4OL突變2例，其中5例新發(fā)突變?nèi)缦?P14 exon F c.367-2 a＞g拼接位點突變，可能RNA剪接會受到影響，未見相關(guān)文獻報道；P15 exon F c.655G＞A p.Val219Ile已有相關(guān)文獻報道；P1父親5exon Fc.655G＞Ap.Val219Ile已有相關(guān)文獻報道，該病是常染色體的顯性遺傳病，按照先前的報道其父親的突變的位點也

3、為致病性的突變，但是實際上父親身體健康，各種指標均正常，此處與以往的報道不符;P23 exon Fc.366+10拼接位點插入片段AGAATCTCCAGGT未見相關(guān)文獻報道；P34 exon Fc.368 T＞Ap.Leu123His未見相關(guān)文獻報道；P45 exon Fc.608G＞Cp.Gly203Asp已有相關(guān)文獻報道；P51 exon Fc.16c＞aSNP未有相關(guān)文獻報道；P62 exon Fc.125C＞T p.Pro42L

4、eu已有相關(guān)文獻報道；P64 exon Fg.855322 C＞ASNP已有相關(guān)文獻報道；P74 exon F c.568 G＞Ap.Val190Met已有相關(guān)文獻報道；P85 exon Fc.669 C＞Ap.Cys223X已有相關(guān)文獻報道；P94 exon Fc.597 C＞T p.F＞FSNP未有相關(guān)文獻報道;P9父親4 exon F c.597 C＞Tp.F＞F未有相關(guān)文獻報道;P94 exon Fc.164 G＞Ap.Cys5

5、5Thr已有相關(guān)文獻報道;CD40L基因突變2例：P10 CD40L c.156+1G＞T拼接位點純合突變已有相關(guān)文獻報道;P11 CD40L c.156+1 G＞T拼接位點純合突變已有相關(guān)文獻報道
　　結(jié)論：通過基因測序突變分析，發(fā)現(xiàn)了一些沒有被報道過的基因突變類型，擴充的基因突變庫的突變種類。基因工程制備的人的重組在中性粒細胞集落刺激因子（G-CSF）可以有效的預防患兒致死性嚴重性的感染的藥物。中性粒細胞的絕對數(shù)量在0.5×1

6、09以下或者有嚴重感染的患者建議使用G-CSF，可減少病死率，提高患兒的生存時間。
　　第二部分乙肝病毒X蛋白對HEK293細胞的獨特作用
　　目的：探索乙肝病毒X蛋白對HEK293細胞的獨特作用揭示其作用的相關(guān)機制。
　　方法：使用流式相關(guān)技術(shù)，檢測EGFP-N3(HEK293)和EGFP-N3-HBx(HEK293-HBx)細胞的細胞增殖及各細胞分裂時期細胞特征；細胞轉(zhuǎn)染的相關(guān)技術(shù)，展現(xiàn)乙肝病毒X蛋白（HBx）對H

7、EK293細胞的影響；用western blot檢測有關(guān)蛋白的表達情況；Real-time PCR測定轉(zhuǎn)染HBx基因細胞中mRNA的實時表達差別情況；組織免疫熒光，觀察細胞形態(tài)差異。
　　結(jié)果：HBx通過使HEK293細胞之間的間隙融合的方式增強HEK293細胞之間的彼此作用；HBx通過增強表達Src蛋白超家族增強E鈣粘蛋白的表達，轉(zhuǎn)染了HBx的HEK293細胞中β-連環(huán)蛋白明顯增加；HBx通過加強細胞周期蛋白（CDK4）的表達使