三氟柳及其配合物抑制血小板聚集和誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡的研究.pdf

1、背景：臨床上用于心腦血管疾病的預(yù)防與治療藥物—阿司匹林，不僅作為抗血小板聚集的經(jīng)典藥物，又具有降低結(jié)腸癌，食管癌，肺癌，宮頸癌，乳腺癌，肝癌，皮膚癌等癌癥的風(fēng)險。但阿司匹林在用于癌癥預(yù)防的過程中所引起的如胃腸道出血限制了其進(jìn)一步應(yīng)用。三氟柳，乙酰水楊酸結(jié)構(gòu)類似物，亦具有抗血小板聚集作用，并應(yīng)用于缺血性中風(fēng)，腦梗塞，短暫缺血性發(fā)作等疾病的臨床治療，對比阿司匹林大大降低出血性風(fēng)險。銅作為胞內(nèi)的必需金屬元素，其潛在的氧化還原活性使得銅參與了胞

2、內(nèi)眾多生化過程。銅的失衡與癌癥、神經(jīng)退行性病變等許多疾病的發(fā)生有關(guān)，最近的研究發(fā)現(xiàn)銅的配合物可以作為蛋白酶體的抑制劑和凋亡誘導(dǎo)因子以用于癌癥的預(yù)防與治療。目前鮮有三氟柳及其配合物作用于腫瘤的報道。
　　目的：1.檢測三氟柳及其金屬離子配合物zhr-315的血小板聚集抑制作用;2.探究三氟柳及zhr-315對肝癌細(xì)胞株HepG2和Bel7402增殖抑制作用;3.觀察三氟柳及zhr-315作用于細(xì)胞后形態(tài)的變化;4.比較三氟柳及zhr

3、-315誘導(dǎo)HepG2和Bel7402凋亡的能力;5.探究三氟柳和zhr-315引起HepG2和Bel7402凋亡的分子機(jī)制，為三氟柳及其配合物的抗癌作用提供新的證據(jù)。
　　方法：1.采用體外實(shí)驗(yàn)的方法，制備富血小板血漿，測定三氟柳和zhr-315對大鼠血小板聚集的抑制作用;2.MTT法檢測兩種藥物對肝癌細(xì)胞株HepG2和Be l7402的細(xì)胞增殖抑制作用;3.倒置光學(xué)顯微鏡觀察藥物作用后細(xì)胞形態(tài)的變化;4.Hoechst3325

4、8比較兩種藥物誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的能力;5.Western blot研究三氟柳和zhr-315引起細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制
　　結(jié)果：1.三氟柳及zhr-315對于由ADP誘導(dǎo)的大鼠血小板聚集均有抑制作用，其IC50分別是1.764mM和0.513mM;2.三氟柳和zhr-315對HepG2和Bel7402細(xì)胞均抑制增殖，且在一定濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)時間和劑量依賴關(guān)系;其IC50值，三氟柳對HepG2和Bel7402細(xì)胞分別是:0.933±0.02

5、1 mM，0.716±0.141mM;zhr-315對HepG2和Bel7402細(xì)胞分別是:0.175±0.039mM，0.137±0.044mM;3.藥物作用后細(xì)胞形態(tài)發(fā)生變化，胞質(zhì)皺縮，內(nèi)容物增多;4.相同濃度下對于同種細(xì)胞zhr-315較三氟柳具有更強(qiáng)的引起細(xì)胞凋亡的能力，HepG2中，0.45、0.93mM濃度下，zhr-315均誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，但并未發(fā)現(xiàn)三氟柳在此濃度下誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡;0.36、0.72mM濃度時，zhr-315均

6、能誘導(dǎo)Bel7402細(xì)胞凋亡，三氟柳卻不能引起細(xì)胞的凋亡;5.三氟柳和zhr-315作用于細(xì)胞后，WB檢測到caspase3，caspase9和PARP的斷裂帶，即藥物通過內(nèi)源性通路引起細(xì)胞凋亡，且與藥物作用濃度呈一定的相關(guān)性;6.三氟柳和zhr-315作用于細(xì)胞后，WB檢測到抗凋亡蛋白Bcl-2，Bcl-xl的降低，促凋亡蛋白Bax的升高，并與藥物作用濃度相關(guān)。
　　結(jié)論：1.三氟柳及zhr-315對于血小板聚集具有抑制作用;2