基于細(xì)胞代謝組學(xué)的抗乙醇損傷活性評(píng)價(jià)方法的建立及應(yīng)用.pdf

1、研究表明，食物中的生物活性物質(zhì)，如白藜蘆醇、番茄紅素、兒茶素、槲皮素、多糖類(lèi)、肽類(lèi)物質(zhì)等均可顯著改善乙醇對(duì)機(jī)體的損傷。細(xì)胞學(xué)方法因具有可模擬體內(nèi)生理環(huán)境、實(shí)驗(yàn)周期較短、成本較低等優(yōu)勢(shì)廣泛應(yīng)用于抗乙醇損傷活性物質(zhì)的評(píng)價(jià)。但傳統(tǒng)的細(xì)胞學(xué)方法檢測(cè)指標(biāo)有限，無(wú)法對(duì)復(fù)雜的活性物質(zhì)作用機(jī)制及活性強(qiáng)弱進(jìn)行全面準(zhǔn)確評(píng)價(jià)。細(xì)胞代謝組學(xué)以細(xì)胞代謝物為研究對(duì)象，可以反映擾動(dòng)狀態(tài)下細(xì)胞表型和細(xì)胞活動(dòng)。運(yùn)用細(xì)胞代謝組學(xué)方法，有望建立一種新的抗乙醇損傷活性評(píng)價(jià)方法

2、，通過(guò)分析活性物質(zhì)干預(yù)后細(xì)胞代謝物的變化對(duì)活性強(qiáng)弱進(jìn)行全面分析及評(píng)價(jià)。本研究采用細(xì)胞代謝組學(xué)研究方法，以L-02細(xì)胞為研究對(duì)象，基于HPLC-MS技術(shù)平臺(tái)，通過(guò)對(duì)干預(yù)前后胞內(nèi)代謝物的分析，結(jié)合多種模式識(shí)別技術(shù)，獲取與乙醇誘導(dǎo)肝細(xì)胞損傷相關(guān)的生物標(biāo)志物，構(gòu)建基于細(xì)胞代謝組學(xué)的抗乙醇損傷活性評(píng)價(jià)方法，并應(yīng)用該方法評(píng)價(jià)油橄欖葉提取物活性。主要研究?jī)?nèi)容如下：
　?。?）乙醇誘導(dǎo)肝細(xì)胞損傷生物標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)。首先通過(guò)MTT及ROS實(shí)驗(yàn)篩選乙醇

3、及VC作用濃度及作用時(shí)間，采用HPLC-DAD對(duì)各組細(xì)胞代謝物進(jìn)行分析，選取33個(gè)共有峰進(jìn)行PCA、OPLS-DA模式識(shí)別分析，獲取與乙醇損傷相關(guān)的14個(gè)代謝物靶標(biāo)。經(jīng)對(duì)照品保留時(shí)間、加標(biāo)法、LC-MS等方法對(duì)14個(gè)潛在生物標(biāo)志物進(jìn)行比對(duì)，最終確認(rèn)8種潛在生物標(biāo)志物，分別為：蘋(píng)果酸、氧化型谷胱甘肽、還原型谷胱甘肽、ATP、苯丙氨酸、AMP、硝基酪氨酸、色氨酸。
　?。?）基于細(xì)胞代謝組學(xué)的抗乙醇損傷活性評(píng)價(jià)方法的建立。以L-02細(xì)

4、胞為研究對(duì)象，以VC為標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，通過(guò)預(yù)先加入不同濃度VC干預(yù)后對(duì)細(xì)胞進(jìn)行乙醇損傷，對(duì)細(xì)胞代謝物進(jìn)行HPLC分析，以前期篩選的潛在生物標(biāo)志物為變量，在對(duì)照組與模型組的OPLS-DA模型基礎(chǔ)上，對(duì)不同濃度VC組進(jìn)行得分散點(diǎn)分布及Y值預(yù)測(cè)，進(jìn)而得到不同濃度VC抗乙醇損傷活性的定性及定量結(jié)果，建立VC濃度與Y預(yù)測(cè)值的回歸方程，將1μg/mL VC的活性能力定義為一個(gè)活性單位，建立基于細(xì)胞代謝組學(xué)的抗乙醇損傷活性評(píng)價(jià)方法。
　?。?）基于細(xì)

5、胞代謝組學(xué)的抗乙醇損傷活性評(píng)價(jià)方法的應(yīng)用。①對(duì)19個(gè)品種油橄欖葉8種營(yíng)養(yǎng)成分及3種活性成分含量進(jìn)行測(cè)定，并運(yùn)用聚類(lèi)分析及主成分分析兩種模式識(shí)別方法對(duì)結(jié)果進(jìn)行分析，結(jié)果表明膳食纖維、還原糖、橄欖苦苷是油橄欖葉的特征成分，與油橄欖葉品質(zhì)密切相關(guān)，并將其分為3類(lèi)，即高膳食纖維+低橄欖苦苷+低還原糖、中膳食纖維+高橄欖苦苷+高還原糖、低膳食纖維+中橄欖苦苷+高還原糖。②采用建立的基于細(xì)胞代謝組學(xué)的抗乙醇損傷活性評(píng)價(jià)方法評(píng)價(jià)不同部位油橄欖葉提取物