2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:課題組前期實驗發(fā)現(xiàn)骨形態(tài)發(fā)生蛋白9(BMP9)在誘導小鼠永生化根尖牙乳頭干細胞(iSCAP)向成骨/成牙本質方向分化方面能力較強,但目前對于相關分子學機制的研究較少。研究發(fā)現(xiàn),Smad信號通路屬于BMP信號傳導系統(tǒng)中的經(jīng)典通路。因此,本課題主要是研究BMP9是否能夠激活iSCAP細胞中的Smad信號通路,以及Smad信號通路在BMP9誘導iSCAP細胞成骨/成牙本質向分化中的作用。
  方法:首先,用Ad-BMP9轉染iSC

2、AP,36h后采用Western免疫印跡實驗檢測Smad1/5/8蛋白的磷酸化水平。隨后,用顯性負性突變受體 ALK1(dnALK1)重組腺病毒和 BMP9條件培養(yǎng)基共同作用于iSCAP,通過Western免疫印跡實驗檢測Smad1/5/8蛋白磷酸化水平;然后,分別采用堿性磷酸酶(ALP)活性檢測和染色方法分析 iSCAP早期成骨/成牙本質指標變化,Western印跡實驗檢測中晚期成骨/成牙本質相關蛋白OCN、OPN表達,茜素紅染色法檢

3、測鈣鹽沉積程度;最后,通過實時熒光定量 PCR(RT-PCR)檢測dnALK1對BMP9誘導iSCAP成骨/成牙本質相關基因Runx2、OCN、OPN和DMP1表達的影響。
  結果:BMP9可上調iSCAP中Smad1/5/8的磷酸化水平;dnALK1競爭性抑制BMP9條件培養(yǎng)基的作用后,Smad1/5/8的磷酸化水平下調,BMP9誘導的iSCAP細胞中早期成骨/成牙本質標志物堿性磷酸酶活性下降,中晚期成骨/成牙本質相關蛋白 O

4、CN、OPN表達減少,晚期成骨/成牙本質標志鈣鹽結節(jié)減少。RT-PCR結果顯示重要成骨轉錄因子Runx2基因表達減少,成骨/成牙本質相關基因OCN、OPN、DMP1的表達也受到了抑制。
  結論:Smad信號通路在BMP9誘導iSCAP成骨/成牙本質過程中存在并起著重要作用。ALK1是BMP9-Smad信號通路中的重要受體, dnALK1能有效拮抗 BMP9蛋白的活性,但是否同樣抑制其他信號通路還需要進一步研究,后續(xù)我們將通過體內

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