VEGF-a增強BMP9介導MSCs成骨分化及機制的研究.pdf

1、骨折、骨缺損以及骨不連是臨床骨科常見疾病，作為現(xiàn)階段最佳的治療方法之自體骨移植然而也存在其明顯缺點（增加手術時間、失血、取材有限、增加患者痛苦等）。因此，如何應用組織工程的理論和技術研究一種或者多種強有力的成骨誘導因子變得非常重要。間充質干細胞(mesenchymal stem cells，MSCs)作為組織工程人工骨中理想的種子細胞，如何有效地促進 MSCs向成骨方向分化是組織工程研究熱點。本研究旨在主要研究血管內皮生長a（vascu

2、lar endothelial growth factor-a，VEGF-a）增強骨形態(tài)發(fā)生蛋白9（bone morphogenetic protein9，BMP9）介導MSCs成骨分化以及機制的研究。本研究采用半定量RT-PCR、免疫細胞化學染色（ICC）、Western blot、堿性磷酸酶（ALP）活性檢測與染色、茜素紅S染色、體內異位成骨實驗、Micro-CT（μ-CT）三維成像以及組織切片染色等實驗方法。首先，檢測VEGF-a

3、的內源性表達以及重組腺病毒adVEGF-a外源性表達情況；其次，檢測VEGF-a對BMP9介導MSCs成骨分化早晚期成骨標志物活性指標ALP、OPN、OCN以及鈣鹽沉積的影響；然后，利用VEGF-a重組腺病毒通過體內實驗，分析VEGF-a對BMP9介導MSCs異位成骨的影響；最后，利用PI3K/Akt抑制劑(LY294002)對VEGF-a影響B(tài)MP9介導MSCs成骨分化進行機制分析。結果顯示，VEGF-a在MSCs中（MEFs、C3H

4、10T1/2、C2C12以及MC3T3E1）均有表達，但內源性表達均很低；VEGF-a能協(xié)同增強BMP9介導MEFs成骨分化的早晚期成骨標志物的活性；在異位成骨實驗中，VEGF-a能增加BMP9介導MEFs異位成骨活性，能明顯增加骨體積，提高成骨活性，但骨密度卻有所下降；VEGF-a協(xié)同增強BMP9介導MEFs成骨分化過程中能明顯激活PI3K/Akt信號通路。應用PI3K/Akt抑制劑（LY294002）能明顯抵消這種協(xié)同作用。綜上結果