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文檔簡介
1、目的:mRNA可變剪接是高等生物生命活動(dòng)復(fù)雜性和多樣性的基礎(chǔ)。目前對mRNA轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的研究尚處于初期階段。我們的研究顯示轉(zhuǎn)移相關(guān)基因1(MTA1)結(jié)合了大量RNA調(diào)控蛋白,在mRNA轉(zhuǎn)錄至翻譯全過程的各個(gè)部位均有分布(核仁—核膜—胞漿—核糖體—RNA顆粒)。基于以上線索,我們擬探索MTA1在mRNA剪接調(diào)控中的作用及這一機(jī)制帶來的下游生物學(xué)表型改變,從而更清晰的了解MTA1在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中的作用。
方法:采用大數(shù)據(jù)分析明
2、確MTA1是否參與mRNA剪接調(diào)控過程;利用分子生物學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)方法聯(lián)合轉(zhuǎn)錄組測序(RNA-seq)技術(shù)確定MTA1對轉(zhuǎn)錄組可變剪接的影響;采用紫外交聯(lián)免疫共沉淀聯(lián)合高通量測序(crosslinking-immunprecipitationand high-throughput sequencing,CLIP-seq)技術(shù)及可獲得的網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)分析MTA1對mRNA進(jìn)行剪接加工的可能機(jī)制及基序;利用多層次組學(xué)分析聯(lián)合免疫互作技術(shù)明確MTA
3、1在mRNA剪接加工中的生物學(xué)功能和分子機(jī)制。
結(jié)果:大數(shù)據(jù)分析結(jié)果表明MTA1在多種類型腫瘤的RNA剪接過程中發(fā)揮調(diào)控功能;RNA-seq獲得MTA1調(diào)控下的mRNA可變剪接譜,顯示MTA1具有比較廣泛的mRNA可變剪接調(diào)控作用;CLIP-seq獲得與MTA1相互作用的mRNA譜,顯示MTA1具有廣泛的RNA結(jié)合能力;多層次組學(xué)分析聯(lián)合免疫互作技術(shù)篩選MTA1在RNA可變剪接調(diào)控中的關(guān)鍵相關(guān)分子,結(jié)果顯示PTBP1與MTA1
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