新的腫瘤轉移相關基因SPARCL1的研究.pdf

1、浙江大學醫(yī)學院博士學位論文新的腫瘤轉移相關基因SPARCL1的研究姓名：胡涵光申請學位級別：博士專業(yè)：腫瘤學指導教師：鄭樹20100401浙江大學博士學位論文摘要實驗方法及結果為了進一步明確SPARCLl的分子生物學功能，我們經(jīng)行了一系列的體內外功能實驗。包括以下內容：1、針對SPARCLl蛋白制備了小鼠單克隆抗體，并證明其具有良好的特異性，能夠用于WesternBlot及免疫組織化學研究；2、構建了SPARCLl原核及真核表達質粒，誘

2、導并純化得到SPARCLl重組蛋白，證明了該基因原核表達產(chǎn)物為二倍聚合體；3、構建了SPARCLl穩(wěn)定表達結直腸癌細胞系RKOSPARCLl及對照細胞系RKOpLXSN，在此基礎上研究表明SPARCLl對腫瘤細胞周期及增殖能力無明顯改變，但可影響腫瘤細胞分化及顯著降低體內外侵襲、轉移能力，尤其在裸鼠體內試驗中發(fā)現(xiàn)該基因高表達后能顯著降低腫瘤細胞肝臟轉移的能力?；贏ffymetrixU133plus20高通量表達譜芯片技術，分別尋找普通

3、培養(yǎng)基及Matrigel基質膠培養(yǎng)條件下，RKO細胞系高表達SPARCLl基因后的差異表達基因并采熒光定量RTPCR驗證部分差異基因的變化趨勢與基因芯片結果一致。采用在線分析軟件DAVID對差異基因進行GeneOntology分析表明細胞骨架蛋白、細胞黏附、細胞運動和細胞周期等與腫瘤相關的GO分類明顯改變?；贙EGGpathway數(shù)據(jù)庫的信號通路分析提示高表達SPARCLl基因后，RKO細胞內黏附通路、細胞通訊及ErbB信號通路出現(xiàn)了

4、明顯抑制，且黏附通路在Matrigel培養(yǎng)基下調明顯而在普通培養(yǎng)基上無變化，提示SPARCLl參與了腫瘤細胞和基質間的相互作用。采用免疫組織化學方法對214例結直腸癌臨床標本腸原發(fā)灶經(jīng)行了SPARCLl蛋白表達情況的檢測，結合臨床病理資料及隨訪情況分析，發(fā)現(xiàn)該基因在高分化腫瘤中的表達顯著高于中低分化組(PO05)；在無轉移的結直腸癌原發(fā)灶中的表達高于有轉移組(PO05)。生存分析表明在214例結直腸癌患者中，SPARCLl高表達與較長生