藍莓花色苷對紫外引起HepG2細胞DNA損傷保護作用的研究.pdf

1、DNA是儲存和傳遞遺傳信息的生物大分子，其分子的完整性對生物生命活動至關重要。隨著現(xiàn)代社會工業(yè)化進程的加快，臭氧層的減少會直接削弱大氣層截留太陽光中紫外線的能力，從而導致到達地面的紫外線明顯增加。過量的紫外輻射可引起細胞內(nèi)DNA堿基發(fā)生突變、DNA斷裂、DNA-DNA交聯(lián)、DNA-蛋白交聯(lián)以及染色體畸變等損傷，DNA損傷若不能及時修復，細胞將發(fā)生癌變甚至死亡。紫外線輻射會導致DNA損傷，造成白內(nèi)障、皮膚光老化、癌變、免疫抑制等一系列疾病

2、的發(fā)生，尋找高效的抗氧化劑是預防和治療紫外損傷的重要手段。
　　本研究對藍莓中的花色苷組分進行分離、純化，其結構分析結果推測藍莓在甲醇、乙醇、水三種溶劑提取后分別得到了以矢車菊素和錦葵色素;矢車菊素;矢車菊素和飛燕草素為主的花色苷成分。
　　本試驗以人肝癌HepG2細胞為實驗材料，用MTT法檢測細胞增殖活性建立了紫外輻射對人肝癌HepG2細胞的損傷模型。實驗分為對照組、紫外照射組和花色苷保護組，經(jīng)紫外線照射20s人肝癌Hep

3、G2細胞，保護組在紫外線照射人肝癌HepG2細胞前預處理藍莓花色苷。用掃描電鏡觀察細胞形態(tài)、Hoechst33258染色觀察細胞核形態(tài)、MTT法檢測細胞增殖活性、單細胞凝膠電泳實驗檢測細胞DNA損傷、流式細胞術檢測細胞內(nèi)活性氧自由基的清除、流式細胞術檢測細胞周期、激光共聚焦顯微鏡分析線粒體跨膜電位的檢測、免疫熒光法檢測γH2AX，RT-PCR檢測p53、p21、Gadd45、MDM2mRNA表達及Westernblotting檢測p53

4、、p-p53、p21、Gadd45、MDM2蛋白表達。
　　結果表明，花色苷保護組可以降低紫外線造成HepG2細胞的死亡率;減少了細胞膜的囊泡，細胞形態(tài)變圓;減少細胞胞核染色質(zhì)濃縮，增加正常細胞形態(tài)的細胞數(shù)目;縮短彗星遷移距離，減輕細胞DNA受損程度;降低細胞內(nèi)ROS含量;減少細胞停滯在G1期的細胞數(shù)目;線粒體跨膜電位相對紫外照射組細胞升高;γH2AX焦點數(shù)目及熒光強度明顯降低;p53、p21、Gadd45、MDM2mRNA表達降