DEC1通過穩(wěn)定cyclin E調(diào)節(jié)乳腺癌細胞增殖.pdf

1、博士學位論文定cyclinE調(diào)節(jié)嬲細胞增殖DEClRegulatesBreastCancerCellProliferationbyStabilizingCyclinEProtein學號：11118044學科、‘專業(yè)：生物化工答辯日期：2015年7月22日大連理工大學DalianUniversityofTechnology大連理工大學博士學位論文摘要全球每年都有數(shù)百萬人死于癌癥，癌癥亦稱惡性腫瘤，它的無限制、無止境地增生往往與細胞周期紊亂

2、有關(guān)。越來越多的數(shù)據(jù)表明細胞周期蛋白cyclinE過表達或其基因擴增與腫瘤形成密切相關(guān)。cyclinE的表達受多種因子的調(diào)節(jié)，這些因子通過調(diào)節(jié)cyclinE的轉(zhuǎn)錄、翻譯及翻譯后修飾進而影響腫瘤的發(fā)生發(fā)展。時鐘蛋白DECl作為一個重要的轉(zhuǎn)錄因子，可以調(diào)節(jié)多種靶基因的表達，參與細胞分化、凋亡、衰老等生物學過程進而調(diào)控腫瘤的發(fā)生發(fā)展。目前的研究結(jié)果表明DECl既可以抑制腫瘤的生長、介導(dǎo)p53誘導(dǎo)的細胞衰老，又可以促進腫瘤細胞的生存起到抗凋亡的

3、作用，但是DECl如何調(diào)節(jié)腫瘤細胞生存以及細胞周期進程的分子機理還不清楚。因此本文著重研究了DECl如何影響乳腺癌細胞的增殖以及對細胞周期蛋白cyclinE穩(wěn)定性及功能的影響。本文主要工作如下：1通過克隆形成實驗和MTT實驗發(fā)現(xiàn)DECl的過表達抑制了MCF7和T47D細胞的生長。相反，干擾DECl后明顯抑制了細胞集落的大小和數(shù)量。2在MCF7細胞中通過免疫印跡、流式細胞術(shù)等方法研究DECl表達的變化。實驗發(fā)現(xiàn)時鐘蛋白DECl在細胞周期的

4、進程中其自身表達存在周期性，主要在G1／S期表達量較高，其表達的變化與細胞周期蛋白cyclinE相似。在MCF7和T47D兩種乳腺癌細胞中，DECl以劑量依賴的方式上調(diào)cyclinE蛋白含量，并且不影響cyclinE的mRNA水平。3DECl上調(diào)cyclinE的蛋白含量但不影響其轉(zhuǎn)錄，因此可能影響cyclinE的降解。通過半衰期實驗證實DECl穩(wěn)定了cyclinE，延長了cyclinE的半衰期。通過免疫印跡實驗，發(fā)現(xiàn)DECl對cycli

5、nE的調(diào)節(jié)依賴cyclinE的泛素E3酶Fbw7，通過免疫共沉淀實驗證實DECl抑制cyclinE與Fbw7a相互作用，抑制cyclinE的泛素化，進而穩(wěn)定cyclinE。4通過免疫共沉淀實驗，哺乳動物雙雜交實驗證實在血清饑餓及正常條件下DECl與周期蛋白cyclinE存在相互作用。同時，內(nèi)源的實驗也驗證了DECl與cyclinE存在相互作用。通過熒光共定位實驗發(fā)現(xiàn)，cyclinE與DECl很好的定位在細胞核中。另外，檢測了DECl與c