miR-365過表達(dá)通過靶向ADAMTS-1刺激乳腺癌細(xì)胞的增殖與侵襲.pdf

1、摘要miR365過表達(dá)通過靶向過表達(dá)通過靶向ADAMTS1刺激乳腺癌細(xì)胞的刺激乳腺癌細(xì)胞的增殖與侵襲增殖與侵襲碩士研究生：柳璐璐導(dǎo)師：李敏鄭州大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院微生物與免疫學(xué)教研室鄭州450001摘要背景與目的背景與目的乳腺癌(Breastcancer)是全世界女性癌癥相關(guān)死亡的一個(gè)主要原因。隨著醫(yī)學(xué)的深入研究，人們逐漸認(rèn)識(shí)到可以通過改變?nèi)橄侔┘?xì)胞的生物學(xué)特性而達(dá)到治療腫瘤的目的，分子靶向治療由此誕生。目前的研究表明，乳腺癌的發(fā)生發(fā)展涉及一

2、系列基因水平上的改變。MicrNAs(miRNAs)是一類保守的小分子內(nèi)源性非編碼RNAs，在多種生理病理學(xué)過程中起重要作用，包括細(xì)胞增殖、分化、細(xì)胞凋亡以及表觀遺傳學(xué)改變等等。miRNAs能靶向靶基因的3′UTR區(qū)，通過抑制基因翻譯或者引起靶基因降解來調(diào)控基因表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)miRNAs在乳腺癌的起始和發(fā)展中起重要作用。自從2005年首次報(bào)道了miRNAs在乳腺癌中的差異表達(dá)，隨后的一系列研究表明miRNAs的異常表達(dá)與乳腺癌密切相關(guān)。

3、因此基于miRNAs的調(diào)控，進(jìn)一步研究新的腫瘤治療方法尤為重要。本研究旨在分析miR365及ADAMTS1mRNA在乳腺癌組織及癌旁組織中的差異表達(dá)及其與乳腺癌臨床病理特征之間的關(guān)系，在體外實(shí)驗(yàn)中研究miR365對(duì)MDAMB231和MCF7乳腺癌細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期和細(xì)胞侵襲能力的影響，并初步探索miR365與ADAMTS1之間的靶向關(guān)系。方法方法1、收集64例乳腺癌患者手術(shù)切除標(biāo)本，采用qRTPCR方法檢測(cè)miR365摘要3.CCK8細(xì)

4、胞生長實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在乳腺癌細(xì)胞MDAMB231和MCF7中，相比于NC組和Blank組，miR365mimics組細(xì)胞的OD450值在2day、3day、4day這三個(gè)時(shí)間點(diǎn)均有所升高，而miR365inhibit組細(xì)胞的OD450值在2day、3day、4day這三個(gè)時(shí)間點(diǎn)均有所降低，尤其是在4day時(shí)具有顯著差異（P0.05）。4.細(xì)胞周期實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在miR365inhibit轉(zhuǎn)染組中處于G0G1期的細(xì)胞數(shù)顯著高于NC組和Bl

5、ank組，同時(shí)處于S期的細(xì)胞數(shù)顯著低于NC組和Blank組（P0.05）。5.Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在MDAMB231細(xì)胞中轉(zhuǎn)染miR365inhibit后穿過基底膜的細(xì)胞數(shù)明顯下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P0.05）。6.雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在MDAMB231細(xì)胞中，miR365mimics與野生型ADAMTS1重組載體共轉(zhuǎn)染組細(xì)胞的熒光素酶活性明顯降低（P0.05），而miR365inhibit與野生型ADAMTS

6、1重組載體共轉(zhuǎn)染組細(xì)胞的熒光素酶活性明顯升高（P0.05），而其他各組共轉(zhuǎn)染之后對(duì)熒光素酶活性沒有明顯影響。7.Reste實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在乳腺癌細(xì)胞MDAMB231細(xì)胞中，與僅轉(zhuǎn)染NC的細(xì)胞相比，miR365mimics轉(zhuǎn)染組細(xì)胞中的ADAMTS1蛋白的表達(dá)量明顯降低，處于G0G1期的細(xì)胞數(shù)明顯減少，侵襲細(xì)胞數(shù)明顯增加（P0.05）；而共轉(zhuǎn)染miR365mimics和表達(dá)載體pcDNA3.1ADAMTS1組和轉(zhuǎn)染表達(dá)載體pcDNA3.1A

7、DAMTS1組的細(xì)胞中ADAMTS1蛋白表達(dá)量均明顯升高，處于G0G1期的細(xì)胞數(shù)明顯增加，并且侵襲細(xì)胞數(shù)明顯減少（P0.05）。結(jié)論結(jié)論1.乳腺癌組織中的miR365異常高表達(dá)，ADAMTS1mRNA相對(duì)明顯低表達(dá)，并與乳腺癌患者的TNM分期有關(guān)。2.下調(diào)miR365的表達(dá)水平能抑制MDAMB231和MCF7乳腺癌細(xì)胞的增殖能力，并能抑制MDAMB231乳腺癌細(xì)胞的侵襲能力。3.miR365可能作為癌基因通過靶向ADAMTS1的3′UT