乳腺癌增殖、遷移及治療反應相關因子的研究.pdf

1、乳腺癌是婦女群體中最常見的惡性腫瘤，約占全球女性所有惡性腫瘤的25％。近年來，通過對乳腺癌表面受體分子的研究，乳腺癌被分為管腔型、HER-2陽性型和基底型。管腔型乳腺癌有雌激素受體和孕激素受體表達，但沒有HER-2表達;HER-2陽性型沒有雌激素受體和孕激素受體表達;基底型則既沒有雌激素受體和孕激素受體表達，也沒有HER-2表達，也稱為“三陰性乳腺癌”。乳腺癌的預后與病理分型、內(nèi)分泌受體的表達以及Her-2表達等密切相關。研究乳腺癌細胞

2、的生物學特性，對制定個性化的治療方案，實現(xiàn)乳腺癌的精準治療非常重要。目前，一些有潛在應用價值的分子指標在乳腺癌中的作用仍存在分歧，如已經(jīng)被鑒定為細胞增殖的高效分子標記物的Ki-67。Ki-67是一個和細胞增殖相關的細胞核抗原，會在除了G0時期以外的其他所有細胞周期表達。有研究表明，Ki-67增殖活性和腫瘤分化、侵襲、轉(zhuǎn)移和預后是相關的。然而，關于Ki-67的表達與管腔型乳腺癌臨床關系的相關研究仍有爭議。
　　鑒于上述原因，本研究的

3、第一項工作探討了Ki-67在管腔型乳腺癌患者中的表達情況及其與臨床病理資料的關系。該研究中一共有62例管腔型乳腺癌患者入選，對照組為年齡相仿的單純?nèi)橄僭錾幕颊?。通過熒光定量PCR的方法檢測Ki-67的表達水平。和對照相比，Ki-67在乳腺癌病人的腫瘤組織中的表達顯著升高(P＜0.05)。乳腺癌腫瘤組織中Ki-67的mRNA水平也顯著高與其在癌旁組織中的水平(P＜0.05)。此外，在乳腺癌中，高表達的Ki-67和腫瘤臨床分期、腫瘤大小、

4、淋巴轉(zhuǎn)移都正相關(P＜0.05)。在降低了Ki-67表達水平的MCF-7細胞中，癌細胞的增殖活性和遷移都降低了(P＜0.05)。結(jié)果表明Ki-67可以通過影響癌細胞的增殖和遷移從而起到促進乳腺癌發(fā)生和發(fā)展的作用。
　　我們又進一步研究了谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶多態(tài)性對乳腺癌預后的影響。我們采用限制性片段長度多態(tài)性結(jié)合聚合酶鏈式反應的方法，對GSTM1，GSTT1和GSTP1的Ⅱe105Val多態(tài)性基因型進行了分析。結(jié)果表明GSTP1Ⅱe1

5、05Val的GG基因型相對于野生型基因型對化療有更好的反應及更長的生存期。
　　進一步，我們針對乳腺癌治療反應相關因素開展了基礎研究，我們發(fā)現(xiàn)HER-2和TOP2A基因的表達影響乳腺癌的放射敏感性。為了探討HER-2和TOP2A基因?qū)θ橄侔┓派涿舾行缘挠绊?，我們分別構(gòu)建表達HER-2或TOP2AshRNA的重組質(zhì)粒，并使用lipofectamine2000將其轉(zhuǎn)染至乳腺癌細胞SK-Br-3中，敲降HER-2和TOP2A的基因表達。

6、轉(zhuǎn)染2天后利用蛋白印跡檢測干擾效果，利用流式細胞儀和MTT法分別檢測放射處理后細胞凋亡和增殖相關蛋白Caspase-3、Bcl-2、Ki-67的表達變化，并采用克隆形成實驗檢測放射敏感性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在乳腺癌細胞SK-Br-3中敲降HER-2和TOP2A的表達，經(jīng)放射處理后Caspase-3表達升高，Bcl-2表達降低，細胞增殖標志蛋白Ki-67表達降低，提示乳腺癌細胞凋亡率升高，增殖率降低。同時敲降HER-2和TOP2A兩個基因可促進凋