角毛殼菌幾丁質(zhì)酶的特性及其基因的誘導(dǎo)和轉(zhuǎn)化.pdf

1、植物病害一直嚴(yán)重威脅著農(nóng)業(yè)生產(chǎn),生防微生物的應(yīng)用是植物病蟲害綜合治理的重要手段,是保護(hù)生態(tài)環(huán)境,實現(xiàn)農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的有力保證。角毛殼菌(Chaetomium cupreum)作為一種重要的生物防治真菌,多年來倍受研究者們的關(guān)注。分別由六種不同植物病原真菌細(xì)胞壁、膠體幾丁質(zhì)、粉末幾丁質(zhì)和羧甲基殼聚糖為誘導(dǎo)物,模擬角毛殼菌(C. cupreum)自然的重寄生過程,研究了不同時間和不同誘導(dǎo)物誘導(dǎo)角毛殼菌產(chǎn)幾丁質(zhì)酶的影響。結(jié)果表明,上述九種誘導(dǎo)

2、物均可誘導(dǎo)角毛殼菌(C. cupreum)產(chǎn)生幾丁質(zhì)酶；由植物病原菌細(xì)胞壁誘導(dǎo)產(chǎn)生的酶活性總體比由幾丁質(zhì)及殼聚糖誘導(dǎo)產(chǎn)生的酶活性高,由立枯絲核菌(Rhizoctonia solani)誘導(dǎo)產(chǎn)生的酶活性較高,最高可達(dá)25.44 U/mL,而由大豆疫霉菌(Phytophthora sojae)誘導(dǎo)產(chǎn)生的酶活性較低,最高酶活性不超過1 U/mL；同時,不同誘導(dǎo)物誘導(dǎo)角毛殼菌(C. cupreum)產(chǎn)生幾丁質(zhì)酶的活性及酶活最高時期有所不同。由楊

3、樹葉枯病菌( Alternaria alternata )細(xì)胞壁、尖孢鐮刀菌(Fusarium oxysparium)細(xì)胞壁、膠體幾丁質(zhì)和粉末幾丁質(zhì)誘導(dǎo)角毛殼菌(C. cupreum)產(chǎn)生的幾丁質(zhì)酶粗酶液的最適作用溫度均為40℃；在50℃以下均具有較好的熱穩(wěn)定性；酶促反應(yīng)的最適pH值均為5.0；在pH值4.0-7.0的范圍內(nèi)均能保持良好的pH穩(wěn)定性。變性劑和蛋白酶抑制劑對幾丁質(zhì)酶活性也都有一定的抑制作用,其中EDTA的抑制作用最為明顯,

4、在10 mmol/L的濃度下,幾丁質(zhì)酶幾乎喪其活性,EDTA對金屬離子有鰲合作用,這也間接說明幾丁質(zhì)酶酶活性依賴于金屬離子。將角毛殼菌(C. cupreum)chi58基因成功地連接到表達(dá)載體pYES2中,構(gòu)建的釀酒酵母(S. scerevisiae)重組表達(dá)載體pYES2-chi58能夠在胞外表達(dá)蛋白,在誘導(dǎo)培養(yǎng)60 h時幾丁質(zhì)酶的活性達(dá)到最高值0.11 U/mL。將角毛殼菌幾丁質(zhì)酶活性與釀酒酵母中chi58基因的表達(dá)活性進(jìn)行對比,結(jié)