雞腿菇（Coprinus comatus）漆酶的誘導(dǎo)及cDNA克隆.pdf

1、漆酶是一種銅多酚氧化酶，主要存在于白腐菌中，是一種分泌至胞外的糖蛋白。漆酶可以降解木質(zhì)素和氧化酚類、芳胺類化合物，有著廣泛的用途。雞腿菇是一種能高效分泌漆酶的白腐菌。 本論文首先研究了雞腿菇在25℃、四種不同培養(yǎng)基中進行液體靜置培養(yǎng)時，漆酶活力的比較。研究表明A培養(yǎng)基(碳源為葡萄糖，氮源為酵母浸膏)的雞腿菇漆酶活性最高。后續(xù)實驗研究了不同的金屬離子和芳香族化合物對漆酶產(chǎn)酶的影響。結(jié)果顯示添加濃度為0.8mmol/L的錳離子和3

2、.0mmol/L的咖啡酸對雞腿菇漆酶的誘導(dǎo)作用最明顯。其它的化學(xué)試劑分別在不同的濃度表現(xiàn)出誘導(dǎo)作用。其中在低濃度表現(xiàn)出最佳誘導(dǎo)作用的是4-甲氧基肉桂酸、茴香酸、3，4，5-三甲氧基肉桂酸、愈創(chuàng)木酚、3，5-二甲氧基-4-羥基肉桂酸、香蘭素、3-(4-甲氧苯基)-丙酸。而Cu2+、3，4-二甲氧基苯甲醛、肉桂酸、4-羥基肉桂酸、3-(4-羥基苯基)-丙酸則在高濃度時誘導(dǎo)效果最好。對碳源和氮源的研究表明最佳碳源是葡萄糖，最佳氮源是蛋白胨。通

3、過不連續(xù)聚丙酰烯酰胺凝膠電泳分析發(fā)現(xiàn)，不同種類、濃度的化學(xué)試劑會誘導(dǎo)產(chǎn)生不同的雞腿菇漆酶的同工酶，由于這些同工酶具有不同的等電點所以電泳中表現(xiàn)出不同的譜帶。漆酶最適反應(yīng)pH值和溫度為6.0和60℃。 本論文實驗還從雞腿菇中提取mRNA，反轉(zhuǎn)錄得到cDNA序列，再根據(jù)真菌漆酶蛋白質(zhì)家族的保守氨基酸結(jié)構(gòu)域設(shè)計一系列簡并性引物，進行PCR擴增得到143bp的雞腿菇漆酶特異性基因片段。再利用BLAST。程序?qū)⒃撔蛄信cNCBI數(shù)據(jù)庫中的