TRB3表達(dá)變化通過MAPK信號通路對肺間質(zhì)纖維化的影響.pdf

1、目的：
　　1.探討TRB3在C57BL/6小鼠纖維化中的作用。
　　2.外源性調(diào)控TRB3對博來霉素誘導(dǎo)的C57BL/6小鼠肺間質(zhì)纖維化的影響，進(jìn)一步在MAPK信號通路中探討三者之間的關(guān)系。
　　方法：
　　1.實驗分組：①單純對照組+生理鹽水（Mock組，對照組）②纖維化組+生理鹽水（fibrosis control組，F(xiàn)組）③纖維化+GFP組（F+GFP組）④纖維化+Ad-TRB3過表達(dá)組（F+TRB3組）

2、⑤纖維化+Ad-TRB3-shRNA干擾組（F+sh-TRB3組）。
　　2.動物造模：博來霉素3.5mg/kg氣管注入，造模次日，進(jìn)行腺病毒尾靜脈注射，分別于第7、14和28天處死實驗小鼠一批，收集BALF、肺組織標(biāo)本供實驗用。
　　3.肺組織HE/Masson染色形態(tài)學(xué)觀察及纖維化評分，進(jìn)行羥脯氨酸測定進(jìn)一步明確膠原蛋白含量。ELASIA檢測肺組織中CollaⅠ/Ⅲ的表達(dá)。免疫組化明確間質(zhì)及上皮相關(guān)蛋白的表達(dá)。對肺泡灌洗

3、液（BALF）進(jìn)行細(xì)胞分類及計數(shù)。
　　4.用Western blot方法從蛋白水平檢測C57BL/6小鼠TRB3、p-ERK1/2、ERK1/2、p-p38MAPK、p38MAPK及EMT相關(guān)蛋白（如E-cadherin、Fibronectin、Vimentin、α-SMA）的表達(dá)情況；用RT-qPCR從mRNA水平檢測TRB3、proCollaⅠ/Ⅲ的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1.成功地構(gòu)建出博來霉素誘導(dǎo)的小鼠肺纖維

4、化模型。
　　2.肺組織HE/Masson染色形態(tài)學(xué)觀察及纖維化評分，肺組織進(jìn)行羥脯氨酸測，結(jié)果顯示：TRB3過表達(dá)纖維化程度更重，TRB3表達(dá)下調(diào)纖維化程度明顯減輕。BALF中，TRB3過表達(dá)表現(xiàn)出細(xì)胞總數(shù)、中性粒細(xì)胞數(shù)明顯增多，巨噬細(xì)胞減少。TRB3表達(dá)下調(diào)組結(jié)果相反。
　　3.Western blot檢測各組肺組織TRB3、p-ERK1/2、ERK1/2、p-p38MAPK、p38MAPK及EMT相關(guān)蛋白（如E-cad

5、herin、Fibronectin、Vimentin、α-SMA）的表達(dá)，RT-qPCR檢測TRB3、proCollaⅠ/ⅢmRNA的表達(dá)，結(jié)果顯示：TRB3過表達(dá)組的p-ERK1/2、ERK1/2、p-p38MAPK、p38MAPK及EMT相關(guān)蛋白及proCollaⅠ/ⅢmRNA的表達(dá)上調(diào)；而TRB3表達(dá)下調(diào)組結(jié)果相反。
　　結(jié)論：
　　1.TRB3過表達(dá)可增加EMT相關(guān)蛋白及mRNA的表達(dá)，TRB3基因表達(dá)下調(diào)后，結(jié)果相