嗜酸乳桿菌細(xì)胞壁肽聚糖的分離提取及其免疫活性的研究.pdf

1、嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)是乳酸菌家族中的重要一員，它能在腸道中定植，當(dāng)達(dá)到一定數(shù)量時(shí)，能改善或調(diào)節(jié)腸道微生物菌群的平衡、增強(qiáng)機(jī)體免疫力及抑制腫瘤細(xì)胞的形成等。肽聚糖(Peptidoglycan，PG)是細(xì)菌等原核生物細(xì)胞壁的特有組成成分。真核細(xì)胞中不含肽聚糖，因此肽聚糖成了真核生物免疫系統(tǒng)識(shí)別的理想靶位。研究表明，高等真核生物體中含有若干肽聚糖識(shí)別分子，這些活性分子通過(guò)不同的信號(hào)傳導(dǎo)途徑誘導(dǎo)釋放免

2、疫調(diào)控物質(zhì)，從而刺激免疫系統(tǒng)發(fā)揮免疫功能。目前，雙歧桿菌細(xì)胞壁肽聚糖已被成功分離提取出來(lái)，并被證明是一種新型的非特異性免疫增強(qiáng)劑。而嗜酸乳桿菌細(xì)胞壁肽聚糖的相關(guān)研究還鮮見(jiàn)報(bào)道。因此，在對(duì)嗜酸乳桿菌細(xì)胞壁肽聚糖進(jìn)行分離提取研究的同時(shí)，結(jié)合生理活性試驗(yàn)證明其免疫活性，對(duì)深層次開(kāi)發(fā)嗜酸乳桿菌微生態(tài)制劑及益生菌免疫佐劑具有重要意義。 本文在篩選生長(zhǎng)期短、產(chǎn)量大的嗜酸乳桿菌菌株，優(yōu)化增菌培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，分別采用超聲波法、溶菌酶法及三氯乙

3、酸法分離提取嗜酸乳桿菌細(xì)胞壁肽聚糖，并通過(guò)生理活性試驗(yàn)證明得到的嗜酸乳桿菌細(xì)胞壁肽聚糖具有抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)功能，為嗜酸乳桿菌微生態(tài)制劑及益生菌免疫佐劑的研究和開(kāi)發(fā)奠定了良好的基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及結(jié)果如下： 1．開(kāi)展了菌株篩選及培養(yǎng)基優(yōu)化的研究。通過(guò)對(duì)多株嗜酸乳桿菌菌株進(jìn)行篩選，得到了1株生長(zhǎng)期較短、產(chǎn)量較大的嗜酸乳桿菌菌株La2；在此基礎(chǔ)上進(jìn)行了增菌培養(yǎng)基的優(yōu)化。使用優(yōu)化得到的增菌培養(yǎng)基測(cè)定La2的生長(zhǎng)曲線，確定了增菌培養(yǎng)基培養(yǎng)終

4、止時(shí)間為12h，此時(shí)OD<,600>值為2.167，pH值為4.01；通過(guò)平板菌落計(jì)數(shù)，活菌數(shù)為3.8x10<'9>cfu/mL，是普通MRS培養(yǎng)基的5.4倍。 2．采用超聲波法、溶菌酶法、三氯乙酸法分離提取La2細(xì)胞壁肽聚糖。其中超聲波法的最優(yōu)組合為：超聲功率400W、超聲時(shí)間30min、超聲溫度40℃，肽聚糖得率為10.2％；溶菌酶法的最優(yōu)組合為：溶菌酶添加量4mg/mL，水浴溫度55℃，作用時(shí)間5h，pH值7，肽聚糖得率

5、為10.0％；三氯乙酸法肽聚糖得率為15.8％。通過(guò)多重比較，確定使用三氯乙酸法提取嗜酸乳桿菌La2細(xì)胞壁肽聚糖。 3．對(duì)得到的肽聚糖提取物的氨基酸組成進(jìn)行了分析，其主要氨基酸組成天冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸、賴氨酸均為嗜酸乳桿菌肽聚糖上與N-乙酰胞壁酸羧基連接的肽鏈上的氨基酸分子；同時(shí)測(cè)得肽聚糖提取物的氨基己糖濃度為2.831mmol/g，磷含量為0.0319mg/g，分子量主要分布在30kD左右。 4．證明了La2細(xì)