Smad4介導的丙戊酸鈉(VPA)抑制腎細胞癌上皮間質轉化(EMT)的機制研究.pdf

1、目的:
　　腎細胞癌在全世界是非常常見的腎惡性腫瘤之一，在人腫瘤中占2-3％，透明細胞癌是最常見的類型。盡管當前醫(yī)學診療技術的快速提高，特別是影像學診斷鑒別技術的高速發(fā)展，腎腫瘤患者的預后仍然不良。相比較非轉移腎腫瘤患者的腫瘤特異性存活率(70％)，轉移性腎腫瘤患者5年腫瘤特異性存活率僅為27.1％，而且腎透明細胞癌傾向于轉移。令人遺憾的是，腎腫瘤的轉移的機制和對治療抵抗性，我們現(xiàn)在仍然沒有完全清楚，這里仍然需要更多研究和關注。上

2、皮間質轉化(EMT)，是組織中表皮細胞向間皮細胞轉換的病理生理過程，在腫瘤向鄰近和遠處組織器官侵襲轉移過程中發(fā)揮著非常重要的作用。發(fā)生EMT過程中，表皮細胞失去它的細胞極性，以及細胞和細胞之間的緊密連接，進而獲得間皮細胞的特征，使腫瘤細胞具有較強的侵襲轉移能力，轉移播散至遠處的臟器器官。這個現(xiàn)象過程由腫瘤微環(huán)境中的多個復合體和生長因子所引起，TGF-β就是這樣一個在腫瘤侵襲轉移過程中具有促進和抑制雙重作用的因子。已有研究關注TGF-β在

3、腫瘤發(fā)生EMT的不同階段發(fā)揮著的重要作用，但其在EMT初始反應過程的作用仍存在未明確之處。Smad4被認為是TGF-β通路和BMP信號通路的關鍵中間傳導蛋白，研究顯示Smad4蛋白的缺失使TGF-β經典的信號通路失去功能，而TGF-β從早期的腫瘤抑制作用到晚期的腫瘤促進作用。通過TGF-β信號通路的經典和非經典的途徑，TGF-β因子發(fā)揮著潛在的誘導形成EMT的作用，Smad4蛋白可以作為腎腫瘤患者預后的獨立因子。組蛋白乙?；腿ヒ阴；?/p>

4、組蛋白表觀學修飾一種，調控基因表達的一種機制。組蛋白乙?；D移酶和去乙?；赴l(fā)揮重要作用，伴隨著組蛋白的乙酰化和去乙?；瑥亩绊懼[瘤基因表達的沉默和激活。VPA屬于Ⅰ類HDAC類抑制劑，數(shù)十年來作為經典的抗癲癇藥物用于臨床，研究發(fā)現(xiàn)VPA還具有多種的抗腫瘤潛能，具有抑制腫瘤細胞的增殖，生長和分化，以及腎癌細胞的周期，凋亡。根據(jù)目前的研究，VPA具有調控Smad4的表達和抑制腫瘤的侵襲轉移的能力，鑒于Smad4在EMT過程中的重要作用

5、，我們認為VPA可能通過調節(jié)Smad4蛋白，進而抑制EMT過程，達到抑制腎腫瘤的侵襲轉移的調控作用。
　　方法:
　　腎癌細胞系給以不同濃度、不同作用時間的VPA刺激，利用實時定量PCR技術和免疫蛋白印跡技術驗證VPA作用后Smad4和EMT相關指標的改變。以過表達Smad4質粒和小干擾RNA轉染腎腫瘤細胞786-0，通過免疫蛋白印記技術實驗檢測在上調或下調Smad4水平后，786-0細胞EMT相關蛋白指標的改變。利用免疫組