轉(zhuǎn)錄因子Gcn4和Ume6在酵母感應(yīng)銅轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)理中作用的研究.pdf

1、銅離子是生物體必不可少的微量元素，參與生物體許多重要的代謝活動(dòng)。銅離子濃度過(guò)高或者過(guò)低被發(fā)現(xiàn)與一些重要疾病相關(guān)。因此，生物體必須把體內(nèi)的銅離子維持在一個(gè)不多不少的穩(wěn)態(tài)平衡。然而生物體究竟是怎樣感應(yīng)體內(nèi)的銅離子濃度變化的？或者說(shuō)在生物體內(nèi)銅離子的生物信號(hào)是什么性質(zhì)？而該生物信號(hào)在生命體內(nèi)又是如何被傳導(dǎo)的？解決這些問(wèn)題將為闡明包括人類在內(nèi)的生物體內(nèi)銅離子的穩(wěn)態(tài)平衡機(jī)制提供重要的參考信息。本論文選擇酵母作為銅離子感應(yīng)信號(hào)的生物模型研究其銅離子

2、感應(yīng)基因 MAC1轉(zhuǎn)錄的調(diào)控機(jī)理。已知在銅匱乏條件下轉(zhuǎn)錄因子Mac1通過(guò)激活CTR1，CTR3，F(xiàn)RE7等基因的表達(dá)使酵母細(xì)胞攝取銅離子來(lái)維持銅離子穩(wěn)態(tài)平衡。測(cè)定 MAC1基因自身的調(diào)控機(jī)理很可能將導(dǎo)致酵母細(xì)胞感應(yīng)銅離子匱乏分子機(jī)理的闡明。
　　實(shí)驗(yàn)室前期成果表明在MAC1基因的啟動(dòng)子區(qū)存在多個(gè)調(diào)控MAC1基因轉(zhuǎn)錄的順式作用元件，Pho2，Ace2，Gcn4，Swi5在MAC1基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控過(guò)程中起重要作用，其中Gcn4起負(fù)調(diào)控作用

3、。本論文在實(shí)驗(yàn)室前期成果的基礎(chǔ)上，對(duì)MAC1轉(zhuǎn)錄的調(diào)控機(jī)理進(jìn)行了進(jìn)一步的研究。通過(guò)基因敲除和點(diǎn)突變的方法，證實(shí)在MAC1啟動(dòng)子存在另外兩個(gè)功能性完全相反的Gcn4順式作用元件，其中位于位于區(qū)域－730 bp至－686 bp的Gcn4結(jié)合位點(diǎn)是一個(gè)負(fù)調(diào)控元件抑制MAC1基因的表達(dá)，而位于－120 bp至－98 bp的位點(diǎn)是一個(gè)正調(diào)控元件激活MAC1基因表達(dá)。點(diǎn)突變實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明位于－60 bp至－50 bp區(qū)域存在一個(gè)減數(shù)分裂性轉(zhuǎn)錄因子 U