Notch信號通路與孤獨(dú)癥大鼠神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育初步研究.pdf

1、目的：本課題通過孤獨(dú)癥大鼠動(dòng)物模型的建立，檢測Notch信號通路關(guān)鍵因子發(fā)狀分裂相關(guān)增強(qiáng)子5（hairy and enhancer of split5,HES5）和星形膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物膠質(zhì)纖維酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）、神經(jīng)細(xì)胞標(biāo)記物β-微管蛋白-Ⅲ(β-tubulin-Ⅲ，TUBB3)在孤獨(dú)癥動(dòng)物模型前額葉皮質(zhì)及海馬的表達(dá)水平，探討Notch信號通路在孤獨(dú)癥發(fā)病機(jī)制中的作用。

2、r>　　方法:1.健康繁殖期Wistar雌鼠20只，體重250-260g，隨機(jī)選取15只在妊娠12.5天（E12.5）腹腔注射丙戊酸鈉（sodium valproate，VPA），其子代為孤獨(dú)癥模型組；其余5只則注射等量生理鹽水，子代為正常對照組。通過比較三箱實(shí)驗(yàn)、自梳理實(shí)驗(yàn)等行為學(xué)檢測驗(yàn)證模型建立是否成功。2.通過蛋白免疫印跡實(shí)驗(yàn)(Western blotting)方法，對比孤獨(dú)癥大鼠模型組與正常對照組出生后42天(P42)前額葉皮質(zhì)

3、及海馬HES5、GFAP及TUBB3的表達(dá)水平變化;通過免疫組織化學(xué)方法了解出生后42天孤獨(dú)癥模型組及正常對照組大鼠前額葉皮質(zhì)及海馬GFAP及TUBB3的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：1.成功建立孤獨(dú)癥動(dòng)物模型：與正常對照組比較，三箱實(shí)驗(yàn)顯示模型組大鼠交互能力障礙、缺乏對新鮮事物的偏好性；自梳理實(shí)驗(yàn)顯示模型組理毛時(shí)間顯著增加（P<0.05）；2. Western blot結(jié)果顯示：與正常對照組比較，模型組大鼠P42前額葉皮質(zhì)中HES5表達(dá)

4、明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）， GFAP表達(dá)明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）, TUBB3的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與正常對照組比較，模型組大鼠P42海馬中TUBB3的表達(dá)明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），HES5和GFAP的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示：P42時(shí)GFAP在模型組和正常對照組大鼠前額葉皮質(zhì)及海馬區(qū)均有表達(dá)，前額葉皮質(zhì)中模型組GFAP的表達(dá)高于正常對照組(P<0.05)，海

5、馬中GFAP的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；P42時(shí)TUBB3在模型組和對照組大鼠前額葉皮質(zhì)及海馬區(qū)均有表達(dá)，模型組海馬中TUBB3的表達(dá)低于正常對照組(P<0.05)，P42時(shí)TUBB3在前額葉皮質(zhì)中的表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：1. VPA母孕期化學(xué)干預(yù)法建立的孤獨(dú)癥大鼠模型，行為學(xué)改變與ASD診斷標(biāo)準(zhǔn)中的核心癥狀相符，是一種可靠的孤獨(dú)癥動(dòng)物模型。2.孤獨(dú)癥大鼠模型前額葉皮質(zhì)星形膠質(zhì)細(xì)胞的增多，可能參與孤獨(dú)癥樣行為學(xué)改變的發(fā)生。