食管鱗癌細(xì)胞中LSD1與mTOR通路相互調(diào)控作用研究.pdf

1、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?br>　　1.探討食管鱗癌中LSD1與mTOR通路相互調(diào)控關(guān)系。
　　2.探討LSD1抑制劑對(duì)食管鱗癌細(xì)胞株增殖作用及其分子作用機(jī)制，為食管鱗癌的分子靶向治療提供理論基礎(chǔ)。
　　實(shí)驗(yàn)方法：
　　1.不同食管鱗癌細(xì)胞株中 LSD1與 mTOR通路相關(guān)蛋白表達(dá)情況。蛋白免疫印跡法（Western blot）檢測(cè)不同食管鱗癌細(xì)胞株中LSD1及mTOR通路相關(guān)蛋白PTEN、p-AKT(ser473)、p-P70S6

2、K、Rictor、Raptor的表達(dá)水平。
　　2. LSD1抑制劑對(duì)食管鱗癌細(xì)胞株TE-1、ECa109細(xì)胞增殖的影響。CCK-8法檢測(cè)LSD1抑制劑處理TE-1、ECa109細(xì)胞48h后細(xì)胞的增殖變化情況。
　　3.抑制LSD1對(duì)mTOR通路相關(guān)蛋白和組蛋白表達(dá)的影響。用LSD1抑制劑分別處理食管鱗癌細(xì)胞株 TE-1、ECa10948h后，Western blot法檢測(cè)LSD1、PTEN、p-P70S6K及組蛋白H3K4

3、me2的表達(dá)水平；用shRNA-LSD1干擾ECa109細(xì)胞中LSD1的表達(dá)水平，Western blot法檢測(cè)檢測(cè)LSD1、PTEN、Rictor、Raptor、p-p70S6K的表達(dá)水平。
　　4.抑制mTOR通路對(duì)LSD1的影響。用mTORC1特異性抑制劑雷帕霉素以及ATP競(jìng)爭(zhēng)性mTORC1/mTORC2雙重抑制劑PP242分別處理ECa109細(xì)胞，Western blot法檢測(cè)不同濃度的PP242(0，1，5，10μM)、

4、雷帕霉素（0，50，100，200nM）作用24h后對(duì)食管鱗癌細(xì)胞ECa109中LSD1、Rictor、Raptor及p-p70S6K等蛋白表達(dá)的影響。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
　　1.所選五株食管鱗癌細(xì)胞TE-1、ECa109、KYSE450、KYSE750、EC9706均檢測(cè)到LSD1表達(dá)，且LSD1表達(dá)存在差異，在ECa109細(xì)胞中LSD1表達(dá)較高。
　　2. LSD1抑制劑處理后，TE-1、ECa109細(xì)胞增殖活力明顯

5、減低，并且mTORC1及mTORC2通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平降低；LSD1的表達(dá)沒(méi)有變化，而其底物 H3K4的雙甲基化水平升高。運(yùn)用shRNA-LSD1干擾 ECa109細(xì)胞中LSD1的表達(dá)后mTORC1，mTORC2通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平降低。
　　3.用雷帕霉素以及PP242分別處理ECa109細(xì)胞后均檢測(cè)到LSD1表達(dá)水平降低。
　　結(jié)論：
　　1. LSD1在五株不同食管鱗癌細(xì)胞 TE-1、ECa109、KYSE45