銅綠假單胞菌對氟喹諾酮類藥物耐藥動態(tài)演變分子機制的體外研究.pdf

1、目的:銅綠假單胞菌的染色體介導氟喹諾酮類藥物耐藥機制主要有耐藥決定選擇區(qū)(QRDR)基因突變及外排系統(tǒng)表達上調，本研究旨在考察銅綠假單胞菌對氟喹諾酮類藥物耐藥的動態(tài)演變分子機制，及耐藥機制間的相互作用。
　　研究方法:對銅綠假單胞菌標準菌株ATCC27853進行耐不同濃度左氧氟沙星及環(huán)丙沙星藥物耐藥菌株的體外篩選，采用Sanger測序法和高通量測序法對耐藥菌株進行QRDR區(qū)域耐藥基因突變檢測，采用Real-time PCR法進行外

2、排系統(tǒng)蛋白mRNA水平檢測，以銅綠假單胞菌標準株ATCC27853作為對照。
　　結果:環(huán)丙沙星較左氧氟沙星相比有更強的殺菌能力。本研究共找到五種不同的QRDR區(qū)域耐藥基因突變，gyrA基因突變?yōu)殂~綠假單胞菌對氟喹諾酮類藥物耐藥主要突變位點，gyrB基因突變和parE基因突變可與之結合起到增強耐藥能力的作用;左氧氟沙星組出現(xiàn)大量耐藥基因突變在4 mg/L篩選濃度下，而環(huán)丙沙星組對應在2 mg/L篩選濃度下。在外排系統(tǒng)表達上調耐藥機

3、制中，以MexC的mRNA水平上調為最主要，MexE與MexX的mRNA水平上調可增強銅綠假單胞菌耐藥能力;環(huán)丙沙星組出現(xiàn)首先mRNA水平上調在0.25 mg/L，對應左氧氟沙星組在0.5mg/L;MexC第二次明顯mRNA水平上調在左氧氟沙星組和環(huán)丙沙星組分別為2mg/L和1 mg/L。通過高通量測序法發(fā)現(xiàn)parE基因突變頻率在8MIC、32MIC及64MIC左氧氟沙星篩選濃度下分別為31.2％、45.8％及98.6％，還發(fā)現(xiàn)未在Sa

4、nger測序中發(fā)現(xiàn)的編碼parC的36位氨基酸基因突變。當有gyrA83基因突變時，MexC的mRNA水平明顯下調，當無gyrA83突變時或在gyrA83基因突變之前，可見MexC表達與MexE表達間存在相互協(xié)同現(xiàn)象。
　　結論:銅綠假單胞菌對氟喹諾酮類耐藥機制中以gyrA基因突變和MexC的mRNA水平上調為主，且存在相互協(xié)同作用。高通量測序發(fā)現(xiàn)，gyrA基因突變頻率最高，隨篩選濃度的不斷遞增，parE基因突變頻率呈遞增趨勢。環(huán)