心血管病患者成體細(xì)胞源性誘導(dǎo)型心肌細(xì)胞的建立.pdf

1、背景:心血管疾病一直嚴(yán)重威脅著人類健康，雖然隨著研究的進(jìn)展，逐漸了解和掌握了部分相關(guān)疾病的流行病學(xué)特點、臨床表現(xiàn)特征及有效的治療方式等，但是相關(guān)機(jī)制研究一直進(jìn)展緩慢，特別是部分遺傳相關(guān)性心血管疾病。原因有很多，其中之一是疾病特異性相關(guān)研究模型匱乏或已有模型無法完全模擬人體內(nèi)疾病過程。而且，由于心肌細(xì)胞自身特性，人類心肌細(xì)胞出生后幾乎不再具備生長增殖能力，使得心肌一旦受損傷后無法發(fā)揮相應(yīng)功能，嚴(yán)重時可導(dǎo)致心力衰竭，危機(jī)患者生命。現(xiàn)有有關(guān)高

2、血壓、冠心病、心律失常、心肌病及先天性心臟病等治療措施，除心臟移植外，多數(shù)是控制癥狀，延緩病情進(jìn)展，無法達(dá)到根治疾病的目的。即使是心臟移植，也面臨供體來源不足、免疫反應(yīng)等多方面不利因素限制。然而，誘導(dǎo)多能干細(xì)胞(inducedpluripotent stem cells，iPSCs)技術(shù)及誘導(dǎo)型心肌細(xì)胞（induced cardiomyocytes，iCMs）定向分化技術(shù)的出現(xiàn)及日漸成熟有望改變這種局面。
　　目的:通過收集和分離

3、臨床心血管疾病患者個體特異性成體細(xì)胞，利用重編程技術(shù)和定向分化技術(shù)先后誘導(dǎo)獲得iPSCs及iCMs，用于疾病機(jī)制研究和藥物篩選應(yīng)用
　　方法與結(jié)果:本研究通過收集心血管疾病患者尿液及外周血液標(biāo)本，進(jìn)而分離出病患特異性的尿液細(xì)胞和單個核細(xì)胞，對兩種成體細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)和擴(kuò)增。然后，通過電轉(zhuǎn)方式，將編碼Oct4、Sox2、Klf4、L-Myc、Lin28、mp53DD和EBNA1的附加體導(dǎo)入體細(xì)胞，經(jīng)重編程培養(yǎng)得到病人和疾病特異性iPSC

4、s。經(jīng)鑒定證實獲得的iPSCs顯微鏡下具備和人類胚胎干細(xì)胞系同樣顯著的核仁結(jié)構(gòu)、較高的細(xì)胞核質(zhì)比及細(xì)胞克隆團(tuán)致密整體呈鋪路石樣外觀、堿性磷酸酶染色陽性特點，免疫熒光染色OCT4、SOX2、NANOG、SSEA-4及TRA-1-60及熒光定量PCR多能性標(biāo)志物結(jié)構(gòu)表達(dá)，體外擬胚體法自發(fā)三胚層分化實驗和體內(nèi)畸胎瘤形成分化發(fā)育潛能實驗均得到證實。之后，利用小分子Rapamycin、CHIR99021、KY02111和XAV939分階段單層無細(xì)