標(biāo)定了花藥特異啟動(dòng)子的tritordeum的篩選及遺傳分析.pdf

1、外源基因定位表達(dá)的實(shí)現(xiàn)，依賴于啟動(dòng)子的合理調(diào)控，特別是一些花藥組織特異性啟動(dòng)子，是創(chuàng)造作物雄性不育系及恢復(fù)系的關(guān)鍵因素。本論文從一批使用無(wú)啟動(dòng)子uidA轉(zhuǎn)化策略轉(zhuǎn)化的tritordeum中，分離出了標(biāo)定有花藥組織特異性啟動(dòng)子的單株并考察了其外源基因的遺傳穩(wěn)定性，為即將開展的啟動(dòng)子分離工作奠定了準(zhǔn)確堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)，取得了如下結(jié)果： 1）對(duì)轉(zhuǎn)基因材料不同生長(zhǎng)時(shí)期的不同組織進(jìn)行Gus組織化學(xué)檢測(cè)，分析了植株中Gus表達(dá)的時(shí)空特異性，應(yīng)用R

2、T-PCR從轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)一步確證了啟動(dòng)子的特異性，所篩選出的單株中，Gus的表達(dá)特異性和T0代表現(xiàn)完全一樣，只限于花藥原基和花粉粒部位。 2）整合位點(diǎn)在各代之間傳遞的頻率較低，即絕大部分子代中外源Gus拷貝發(fā)生完全缺失，明顯不符合顯性：隱性（3:1）規(guī)律，但Gus的表達(dá)特異性在各代之間傳遞時(shí)有著極強(qiáng)的遺傳穩(wěn)定性，這說(shuō)明了此轉(zhuǎn)基因麥類雖然經(jīng)歷了多次傳代，但其內(nèi)源性啟動(dòng)子的結(jié)構(gòu)完整、功能正常。 3）外源基因插入到作物內(nèi)源啟動(dòng)子