柑橘果實特異性啟動子的克隆與鑒定.pdf

1、啟動子是基因表達調(diào)控的重要元件，在植物轉(zhuǎn)基因表達載體所選擇的啟動子中，應(yīng)用最為廣泛的是組成型啟動子，如CaMV35S。然而組成型啟動子會導(dǎo)致目的基因產(chǎn)物在整個植株大量積累，可能會影響植株的其他組織器官的正常生長發(fā)育，從而可能導(dǎo)致死亡。而組織特異性啟動子（如根、莖、花、果特異表達啟動子）可以將目的基因特異的表達于目標(biāo)器官或組織，一方面避免基因的組成型表達對其他組織器官生長發(fā)育的影響，從而更好的進行基因功能驗證，另一方面，也能夠更具有目的性

2、的在某個特定組織器官特異性高效表達，進行高效地轉(zhuǎn)基因育種。本研究基于柑橘基因組RNA-seq數(shù)據(jù)，用各個不同組織器官材料進行實時熒光定量驗證，篩選出幾個柑橘果實特異性啟動子，并開展了轉(zhuǎn)基因驗證工作。
　　本實驗具體從以下幾個方面獲得結(jié)果:
　　1)根據(jù)全基因組RNA-seq數(shù)據(jù)的分析，篩選得到果實中特異性高表達的七個基因。通過實時定量PCR對七個基因的表達模式進行了分析，篩選到了一個在果實中表達水平遠高于（高低110倍）葉片

3、和花的基因。
　　2)啟動子的克隆與表達載體構(gòu)建?？寺〉玫絧CitPDILP啟動子，該啟動子長1913bp;利用PMV2-DR5載體構(gòu)建pCitPDILP啟動子的GUS融合表達載體和一個陽性對照35S啟動子的GUS融合表達載體;PMV2-DR5同時擁有GUS和YFP兩種報告基因;
　　3)瞬時表達驗證啟動子的果實特異性。用農(nóng)桿菌滲入瞬時轉(zhuǎn)化的方法，將帶有pCitPDILP啟動子的載體和帶有35S啟動子的載體分別轉(zhuǎn)入了番茄;載