擬南芥AtPLC5特異性抗體的制備及啟動(dòng)子活性的初步分析.pdf

1、磷酸肌醇特異性磷脂酶C廣泛存在于真核生物中，是真核生物細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的重要組分之一。PI-PLC可特異的水解4，5-二磷酸肌醇(簡(jiǎn)稱PIP2)，產(chǎn)生兩個(gè)第二信使，即1，4，5-三磷酸肌醇和1，2-二?；视?。PI-PLC在植物對(duì)于諸如滲透壓的改變、生長(zhǎng)素及ABA的處理、光和重力的變化、病原菌的侵染等胞外刺激的響應(yīng)，及授粉等發(fā)育過(guò)程的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中發(fā)揮重要的作用。Ca2+是植物PI-PLC的重要調(diào)節(jié)因子。模式植物擬南芥基因組中，存在9個(gè)推測(cè)

2、的PI-PLC基因(其中At3g55940和At2g40116兩個(gè)基因到目前為止，尚未發(fā)現(xiàn)cDNA序列)。已報(bào)道的PI-PLC有AtPLC1S、AtPLC1F、AtPLC2和AtPLC6。在擬南芥第V染色體的一段13kb大小的DNA序列中，存在一個(gè)與AtPLC1S和AtPLC6順序排列的基因序列，推測(cè)其編碼PI-PLC。本實(shí)驗(yàn)室克隆到了這個(gè)基因的全長(zhǎng)cDNA，并命名為AtPLC5。推測(cè)的氨基酸序列分析結(jié)果表明，其具有典型的植物PI-PL

3、C的結(jié)構(gòu)，既具有1個(gè)EF-Hand,1個(gè)X和Y結(jié)構(gòu)域及C2結(jié)構(gòu)域。結(jié)構(gòu)上類似與動(dòng)物細(xì)胞中的PI-PLCξ異型體。選擇保守性較差的AtPLC5N端序列融合Flag-tag后原核表達(dá)作為抗原，通過(guò)免疫兔子，獲得抗AtPLC5的多克隆抗體。該抗體只識(shí)別AtPLC5而不識(shí)別擬南芥中的其他6個(gè)PI-PLC異型體的原核表達(dá)產(chǎn)物。證明我們獲得了AtPLC5的特異性多克隆抗體。用兩相法分離質(zhì)膜后，以該抗體進(jìn)行的免疫印跡結(jié)果表明，AtPLC5存在于質(zhì)膜組