MicroRNA-581通過EDEM1調(diào)節(jié)HBsAg的表達.pdf

1、乙型肝炎病毒（HBV）感染嚴重影響著人類的健康，血清HBV表面抗原（HBsAg）是篩查HBV感染的指標之一，血清HBsAg陽性也是肝細胞肝癌發(fā)生的重要危險因素。MiRNAs在肝癌組織中表達通常呈下降趨勢，但這種表達下調(diào)是否影響HBsAg的表達還不明確。我們的研究發(fā)現(xiàn):在肝癌細胞中過表達miR-581可促進HBsAg的表達。此外，miR-581是通過與EDEM1基因的3'端非翻譯區(qū)(UTR)的識別結(jié)合來發(fā)揮抑制作用的。EDEM1可調(diào)節(jié)HB

2、sAg的降解，我們發(fā)現(xiàn)過表達EDEM1可抑制miR-581對HBsAg表達的誘導(dǎo)。因此，肝癌細胞中miR-581對HBsAg表達的調(diào)節(jié)是由EDEM1介導(dǎo)的。肝癌細胞中miR-581表達的下調(diào)可能是降低HBsAg表達并阻礙肝細胞肝癌發(fā)展的重要原因。
　　目的:
　　在HepG2.2.15和Huh7兩種不同的肝癌細胞中，探究miR-581對HBsAg的表達是否具有調(diào)控作用及其可能的作用機制。
　　方法:
　　(1)在

3、HepG2.2.15和Huh7細胞系中過表達或敲低miR-581，通過ELISA及Western blot檢測HBsAg的表達水平。
　　(2)用雙熒光素酶報告基因?qū)嶒灆z測miR-581對其靶基因的3'-UTR識別和調(diào)節(jié)作用。
　　(3)在HepG2.2.15和Huh7細胞系中過表達或敲低miR-581，用實時熒光定量(RT-PCR)和Western blot檢測EDEM1的表達水平。
　　(4)在HepG2.2.15

4、和Huh7細胞系中同時過表達EDEM1與miR-581，用ELISA及Western blot檢測HBsAg的表達水平。
　　結(jié)果:
　　(1)過表達miR-581使HBsAg的表達上調(diào)。
　　(2) MiR-581結(jié)合到EDEM1的3'-UTR。
　　(3)過表達miR-581可同時下調(diào)EDED1的蛋白和mRNA表達水平。
　　(4) EDEM1介導(dǎo)miR-581對HBsAg表達的調(diào)節(jié)。
　　結(jié)論: