2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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1、基因治療(gene therapy)是指將外源基因(RNA或pDNA)導(dǎo)入到特定細(xì)胞中,以糾正因基因異?;蜓a(bǔ)償因基因缺陷而引起的各種異常,發(fā)揮治療疾病的作用。目前來看,基因治療技術(shù)在臨床上還不夠成熟,尚未能夠應(yīng)用于臨床。外源基因片段不能主動(dòng)進(jìn)入細(xì)胞,需要載體的輔助才能進(jìn)入細(xì)胞發(fā)揮作用,基因治療應(yīng)用于臨床面臨的一個(gè)最大障礙就是缺乏合適的基因載體(gene vector),高效和安全是基因載體的兩項(xiàng)基本要求。因此開發(fā)新型基因載體具有非常重要

2、的意義。
  本課題基于細(xì)胞穿透肽跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)的原理,結(jié)合相關(guān)研究報(bào)道,設(shè)計(jì)了一種可降解多肽基因載體SHRss,該載體由硬脂?;暮彼帷⒔M氨酸、半胱氨酸多肽經(jīng)二硫鍵橋連而成。體內(nèi)外評(píng)價(jià)結(jié)果表明,載體具有較高的siRNA遞送效率,同時(shí)保持了較低的細(xì)胞毒性。
  第一部分利用多肽固相合成法合成了多肽H3CR5C,并以同樣的方法將硬脂酰基團(tuán)連接到多肽上得到stearyl-H3CR5C,利用制備高效液相對(duì)其進(jìn)行了純化,HPLC法檢測(cè)

3、多肽和硬脂酰多肽的純度在95%以上,HPLC-MS對(duì)多肽和硬脂酰多肽進(jìn)行了鑒定。利用低濃度過氧化氫氧化法,將硬脂酰多肽中的巰基氧化成二硫鍵將其橋連起來得到SHRss,并用半胱氨酸控制橋連程度,H-NMR和GPC結(jié)果表明SHRss成功合成。
  第二部分對(duì)可降解多肽基因載體SHRss進(jìn)行了體外評(píng)價(jià)。SHRss/siRNA納米復(fù)合物在N/P=10時(shí)的粒徑最小,粒徑在150-300nm之間,電位在25-40mV之間,透射電鏡觀察到的納米

4、復(fù)合物近似球形,結(jié)構(gòu)完整。SHRss2在N/P=5可以完全包裹住siRNA,并增加siRNA在血清中的穩(wěn)定性。Luc-Hela細(xì)胞對(duì)SHRss/siRNA納米復(fù)合物具有有非常高的細(xì)胞攝取。SHRss/siRNA納米復(fù)合物在Luc-Hela細(xì)胞和mCherry-HEK293細(xì)胞中均表現(xiàn)出較高的siRNA遞送效率。入胞機(jī)制研究結(jié)果表明,SHRss/siRNA納米復(fù)合物的入胞途徑主要為網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞和質(zhì)膜微囊介導(dǎo)的內(nèi)吞。激光共聚焦顯微鏡觀

5、察發(fā)現(xiàn),SHRss/Cy3-siRNA納米復(fù)合物在入胞后可以成功的從內(nèi)涵體逃逸,均勻的分布于細(xì)胞質(zhì)。SHRss的細(xì)胞毒性小于Lipofectamine2000和PEI25kDa,具有良好的生物相容性,二硫鍵的引入沒有明顯增加載體的毒性。
  第三部分對(duì)四種可降解多肽基因載體在體外評(píng)價(jià)中表現(xiàn)最佳的SHRss2進(jìn)行了荷瘤裸鼠遞送siRNA的體內(nèi)研究。結(jié)果表明SHRss2/siRNA納米復(fù)合物在尾靜脈注射后可以較多的累積在荷瘤裸鼠的腫瘤

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