小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中AC基因亞型的表達(dá)及AC3對(duì)其纖毛長(zhǎng)度的影響.pdf

1、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（Bone marrow stromal cells，BMSCs),也稱骨髓基質(zhì)來(lái)源干細(xì)胞，是存在于骨髓中的一類具有多向分化潛能的干細(xì)胞，可分化為成骨細(xì)胞、骨骼肌細(xì)胞及脂肪細(xì)胞等，參與體內(nèi)骨平衡調(diào)節(jié)和骨造血微環(huán)境構(gòu)成。腺苷酸環(huán)化酶（ Adenylyl cyclase，AC）作為第二信使cAMP信號(hào)通路的重要組分，在BMSCs的成骨/成脂分化中具有重要作用，但BMSCs中AC亞型表達(dá)種類，尚待明了。初級(jí)纖毛（Primary

2、 cilia）是一種突出于真核細(xì)胞表面的“毛發(fā)狀”細(xì)胞器，是原生生物到脊椎動(dòng)物中一種在進(jìn)化上高度保守且必不可少的細(xì)胞器，具有感測(cè)和轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)械力和化學(xué)信號(hào)并產(chǎn)生信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)等功能，對(duì)BMSCs細(xì)胞增殖與分化具有關(guān)鍵作用。AC3不僅在哺乳動(dòng)物主要嗅覺(jué)表皮組織神經(jīng)細(xì)胞的初級(jí)纖毛介導(dǎo)的嗅覺(jué)信號(hào)傳導(dǎo)過(guò)程中具有重要調(diào)節(jié)作用，還與BMSCs中的初級(jí)纖毛共表達(dá)。但AC3是否影響B(tài)MSCs中細(xì)胞纖毛長(zhǎng)度進(jìn)而影響B(tài)MSCs的增殖與分化，尚未明確。
　　

3、本研究通過(guò)對(duì)小鼠BMSCs原代培養(yǎng)條件優(yōu)化，發(fā)現(xiàn)小鼠BMSCs原代培養(yǎng)在以4.0×106cell/mL的骨髓單核細(xì)胞濃度培養(yǎng)，并于4d首次換液，增殖速度快，生長(zhǎng)狀態(tài)良好。對(duì)最適培養(yǎng)條件下生長(zhǎng)良好的的細(xì)胞，提取其總RNA并反轉(zhuǎn)錄；采用RT-PCR和序列比對(duì)分析，確定了在原代小鼠BMSCs中有6種AC亞型表達(dá)，分別為AC2、AC3、AC4、AC6、AC7和AC9；分別對(duì)野生型小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（WT-BMSCs）和AC3基因敲除型小鼠骨髓

4、間充質(zhì)干細(xì)胞（MUT-BMSCs）進(jìn)行體外培養(yǎng)、饑餓誘導(dǎo)和LiCl刺激，利用細(xì)胞免疫熒光染色對(duì)初級(jí)纖毛進(jìn)行亞定位及長(zhǎng)度統(tǒng)計(jì)分析。相同體外培養(yǎng)條件下，相較于WT-BMSCs細(xì)胞，MUT-BMSCs細(xì)胞增殖速度相對(duì)較慢；同時(shí)，體外誘導(dǎo)條件下，WT-BMSCs細(xì)胞初級(jí)纖毛長(zhǎng)度最長(zhǎng)為8.96μm，MUT-BMSCs細(xì)胞初級(jí)纖毛長(zhǎng)度最長(zhǎng)為5.61μm，MUT-BMSCs細(xì)胞初級(jí)纖毛長(zhǎng)度明顯短于WT-BMSCs細(xì)胞初級(jí)纖毛長(zhǎng)度。本研究明確了原代小鼠