羊組織中安乃近代謝物殘留量的測定.pdf

1、安乃近(Dipyrone，DIP)屬于呲唑酮類非甾體抗炎藥，1922年最早在德國上市。由于其療效確切，價廉易得，因此在人醫(yī)和獸醫(yī)臨床上都有著廣泛的應用，主要作為一些嚴重疾病的輔助對癥藥物。
　　由于安乃近在獸醫(yī)臨床上的大量廣泛使用和不合理用藥，使得其在動物性食品中的殘留對人類生命和財產(chǎn)的安全危害越來越大。目前，包括中國農(nóng)業(yè)部、歐洲共同體藥物評審委員會等組織都對安乃近在動物組織中（包括豬、牛和馬）的最高殘留限量(MRLs)做出了規(guī)定

2、。安乃近被歸類為一種典型的前藥，它在體內(nèi)迅速吸收、代謝，主要產(chǎn)生四種代謝產(chǎn)物:包括4-甲氨基安替比林(4-MAA)、4-甲酰氨基安替比林(4-FAA)、4-氨基安替比林(4-AA)和4-乙酰氨基安替比林(4-AAA)。其中MAA在體內(nèi)存留時間最長、分布最為廣泛，因此以上組織統(tǒng)一將其規(guī)定為安乃近的殘留標示物。目前，未見關于安乃近及其代謝物在羊不同組織（肌肉、脂肪、肝臟和腎臟）中殘留量的檢測的報道。
　　本論文研究的目的是建立一種快速

3、、靈敏、可信的LC-MS/MS檢測方法，用于檢測羊組織（肌肉、脂肪、肝臟和腎臟）中安乃近四種代謝產(chǎn)物的殘留。主要結論如下:
　　1.LC-MS/MS法鑒定羊血漿中安乃近代謝物
　　本試驗通過給羊肌肉注射30 mg/kg bw的安乃近，采集羊新鮮靜脈血，離心后取血漿，采用三重四級桿質譜全掃描、子離子掃描、多反應監(jiān)測和中性丟失掃描四種方式對血漿中的安乃近代謝物進行測定。試驗證實血漿中存在安乃近的四種代謝產(chǎn)物AA、MAA、FAA和

4、AAA，證明安乃近在羊體內(nèi)的代謝和已知動物（包括豬、牛和馬）相似。佐證了本試驗中對羊組織中AA、MAA、FAA和AAA進行檢測的合理性。
　　2.羊肌肉、脂肪、肝臟和腎臟中安乃近四種代謝產(chǎn)物殘留方法的建立
　　建立了一種快速、靈敏、可靠的LC-MS/MS方法用于安乃近代謝物在羊肌肉、脂肪、肝臟和腎臟中的檢測。本試驗選用乙腈和氨水的混合溶液作為提取溶劑對組織中的代謝物進行提取，經(jīng)過無水硫酸鈉氯化鈉脫水、濃縮和復溶后，過Oasi

5、sTM MAX固相萃取柱凈化，使用親水作用色譜柱(HILIC)分離。待測物通過三重四級桿質譜正離子模式下多反應監(jiān)測方式進行檢測，外標法定量。結果顯示4-甲氨基安替比林、4-甲酰氨基安替比林和4-乙酰氨基安替比林在添加量為4-200μg/kg范圍內(nèi)線性良好;4-氨基安替比林在添加濃度為40-2000μg/kg范圍內(nèi)線性良好，四種待測物在所有組織中的回收率都在84.7％～113.2％的范圍內(nèi)，相對標準偏差(RSD)均小于16.0％。MAA、

6、FAA和AAA在各組織中的檢測限均為0.08～1.2μg/kg，定量限為0.4～6μg/kg;AA在各個組織中的檢測限均為2～25μg/kg，定量限為10～125μg/kg。
　　3.實際樣品檢測
　　本方法用于對大型超市、農(nóng)貿(mào)市場購買的實際樣品和動物試驗給藥后采集的樣品進行檢測。超市的實際樣品檢測中未檢出安乃近四種代謝產(chǎn)物超過最大殘留限量的濃度;動物試驗的實際檢測結果顯示四種代謝物的殘留量有隨著停藥時間的延長而逐漸降低的趨

7、勢。結果進一步驗證了本方法在羊組織中檢測安乃近四種代謝產(chǎn)物的可行性。
　　綜上所述，本研究首先確定安乃近在羊體內(nèi)代謝產(chǎn)生了甲氨基安替比林、甲酰氨基安替比林、氨基安替比林和乙酰氨基安替比林四種主要代謝物。之后成功建立了在羊的肌肉、脂肪、肝臟和腎臟這四種組織中同時檢測安乃近四種代謝產(chǎn)物殘留的高效液相色譜-串聯(lián)質譜分析方法，方法的靈敏度高，重現(xiàn)性好，準確度和精密度都能滿足中國農(nóng)業(yè)部獸藥殘留相關文件規(guī)定的要求。而且本方法經(jīng)過檢測實際樣品的