小鼠梗阻性黃疸及膽汁內(nèi)外引流動(dòng)物模型的建立及各組肝臟組織中膽汁酸受體TGR5的表達(dá)研究.pdf

1、背景及目的:黃疸是臨床上常見的體征之一，梗黃發(fā)生時(shí)可通過(guò)引起機(jī)體的內(nèi)環(huán)境變化導(dǎo)致機(jī)體免疫狀態(tài)改變，腸道免疫功能異常，嚴(yán)重營(yíng)養(yǎng)不良，凝血異常，甚至心功能不全，腎、肝臟功能損傷等身體器官的損害。對(duì)于一些需要手術(shù)治療的梗黃患者，在術(shù)前減黃的方式的選擇目前尚存在爭(zhēng)議。同時(shí)有研究發(fā)現(xiàn)膽汁酸受體TGR5在肝臟炎性反應(yīng)過(guò)程中起到一定的調(diào)節(jié)作用。本研究嘗試探索建立小鼠的梗阻性黃疸及膽汁內(nèi)、外引流模型。并對(duì)梗阻性黃疸及膽汁內(nèi)外引流術(shù)后的小鼠肝臟內(nèi)TGR5

2、的表達(dá)情況進(jìn)行了初步研究，探討其是否參與并調(diào)節(jié)這一過(guò)程的病理生理變化。
　　材料與方法:為了探索建立小鼠模型，本研究采用雄性昆明小鼠153只，隨機(jī)分為假手術(shù)組(SH)，梗阻性黃疸組(OJ)，膽汁外引流組(ED)及膽汁內(nèi)引流組(ID)四組。參考大鼠建模方法，重新改進(jìn)并建立小鼠動(dòng)物模型。第一次手術(shù)建立SH組和OJ組，第二次手術(shù)在梗黃后第五天實(shí)施，OJ及SH組在第一次手術(shù)后第五天采集血液和肝臟組織標(biāo)本ID及ED組于第二次手術(shù)后第五天采集

3、。為了確定建模是否成功并探索TGR5是否參與梗阻性黃疸及膽汁引流過(guò)程中肝臟炎癥調(diào)節(jié)。將血液樣本送檢驗(yàn)科檢測(cè)生化指標(biāo)，對(duì)收集的肝臟組織一部分行HE染色，另一部分行Real-time PCR及Western blot檢測(cè)肝臟中TGR5 mRNA及蛋白水平的表達(dá)情況。結(jié)果:本研究成功建立了小鼠梗阻性黃疸及膽汁內(nèi)、外引流術(shù)的動(dòng)物模型。在對(duì)各組肝臟組織進(jìn)行HE染色，血樣進(jìn)行生化檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)SH組肝臟組織形態(tài)及生化指標(biāo)上均未見明顯異常，而OJ組肝組織

4、內(nèi)可發(fā)現(xiàn)肝纖維化、水腫變性及炎癥壞死等改變，生化指標(biāo)提示膽紅素升高肝功能異常。在行ED和ID治療后可不同程度的改善肝臟損傷，且生化指標(biāo)趨于正常。提示梗黃及引流模型可靠有效。
　　在mRNA和蛋白水平對(duì)各組TGR5表達(dá)情況進(jìn)行檢測(cè)顯示:OJ組TGR5 mRNA表達(dá)水平較SH組上調(diào)1.3倍(P=0.005);ED組及ID組中，TGR5 mRNA表達(dá)水平較OJ組明顯下調(diào)(P＜0.05)，與SH組相比無(wú)明顯差異。但不同引流方式對(duì)TGR5m

5、RNA表達(dá)水平無(wú)明顯影響。蛋白水平檢測(cè)結(jié)果與mRNA檢測(cè)結(jié)果一致，提示與SH組相比，梗阻性黃疸時(shí)肝臟TGR5的表達(dá)水平明顯上調(diào)，經(jīng)引流后TGR5表達(dá)水平基本恢復(fù)正常，但內(nèi)、外引流的手術(shù)方式對(duì)TGR5的表達(dá)水平無(wú)明顯影響。
　　結(jié)論:本研究成功建立小鼠的梗阻性黃疸及膽汁內(nèi)、外引流模型。梗阻性黃疽小鼠肝臟組織內(nèi)TGR5表達(dá)明顯增高，膽汁引流術(shù)可逆轉(zhuǎn)這一改變。提示在梗阻性黃疸發(fā)生后肝臟損傷及膽汁引流術(shù)后肝臟修復(fù)炎癥消退的過(guò)程可能與TGR