膦甲酸鈉對(duì)硫酸頭孢噻利在大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)的影響.pdf

1、目的:建立大鼠血漿中硫酸頭孢噻利的HPLC測(cè)定方法;考察膦甲酸鈉與硫酸頭孢噻利合用后，硫酸頭孢噻利藥動(dòng)學(xué)參數(shù)的變化，從而確定膦甲酸鈉對(duì)硫酸頭孢噻利在大鼠體內(nèi)是否存在影響。
　　方法:(1)色譜條件:色譜柱:Diamonsil C18色譜柱(250 mm×4.6 mm,5μm);檢測(cè)器:Waters2489 UV監(jiān)測(cè)器;檢測(cè)波長(zhǎng):254 nm;柱溫:30℃;流動(dòng)相:乙腈-水(12∶88，V/V);流速:1.0 ml·min-1;進(jìn)樣

2、量:20μl;內(nèi)標(biāo):甲硝唑。(2)血漿樣品處理:取血漿樣品200μl，加入內(nèi)標(biāo)溶液20μl混勻，加4％高氯酸200μl，渦旋，離心。取上清液150μl，加入純凈水600μl稀釋混勻，20μl進(jìn)樣。(3)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備:配置濃度為5，10，25，50，100，200，400，800，1600，2000 mg·L-1的硫酸頭孢噻利模擬血漿樣品，并將其分為標(biāo)準(zhǔn)曲線Ⅰ組(5～100 mg·L-1)和標(biāo)準(zhǔn)曲線Ⅱ組(100～2000 mg·L-1)

3、，按血漿樣品處理方法處理后進(jìn)樣。以硫酸頭孢噻利與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值(Y)對(duì)血漿藥物濃度(X)進(jìn)行線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程Ⅰ和標(biāo)準(zhǔn)曲線方程Ⅱ。(4)回收率:分別制備標(biāo)準(zhǔn)曲線1低(10mg·L-1)、中(40 mg·L-1)、高(80 mg·L-1)和標(biāo)準(zhǔn)曲線Ⅱ低(200 mg·L-1)、中(800 mg·L-1)、高(1600 mg·L-1)6種濃度硫酸頭孢噻利模擬血漿樣品，按血漿樣品處理方法處理后進(jìn)樣，硫酸頭孢噻剝的峰面積與等量硫酸頭孢噻

4、利對(duì)照品溶液直接進(jìn)樣的峰面積比值即為硫酸頭孢噻利的絕對(duì)回收率;內(nèi)標(biāo)峰面積與等量甲硝唑內(nèi)標(biāo)溶液直接進(jìn)樣的峰面積比值即為內(nèi)標(biāo)絕對(duì)回收率;根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算測(cè)得濃度與理論濃度的比值即為相對(duì)回收率。(5)精密度:分別制備標(biāo)準(zhǔn)曲線Ⅰ低(10 mg·L-1)、中(40 mg·L-1)、高(80 mg·L-1)和標(biāo)準(zhǔn)曲線Ⅱ低(200 mg·L-1)、中(800 mg·L-1)、高(1600mg·L-1)6種濃度硫酸頭孢噻利模擬血漿樣品，分別于一日內(nèi)

5、不同時(shí)間處理并測(cè)定，計(jì)算日內(nèi)精密度;連續(xù)5天處理并測(cè)定，計(jì)算日間精密度。(6)穩(wěn)定性:分別制備制備40 mg·L-1和800 mg·L-1的硫酸頭孢噻利模擬血漿樣品，按血漿樣品處理方法處理后分別于0、1、2、3、4h測(cè)定，考察處理后血漿樣品室溫放置穩(wěn)定性;即刻處理或反復(fù)凍融3次處理后，分別測(cè)定，考察血漿樣品反復(fù)凍融穩(wěn)定性;即刻處理或于-40℃低溫保存5天后處理，分別測(cè)定，考察硫酸頭孢噻利血漿樣品低溫保存穩(wěn)定性。(7)藥動(dòng)學(xué)實(shí)驗(yàn):健康Wi

6、star大鼠40只，隨機(jī)分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，每組20只。對(duì)照組尾靜脈注射硫酸頭孢噻利200 mg·kg-1，實(shí)驗(yàn)組尾靜脈注射膦甲酸鈉360 mg·kg-1后，即刻注射硫酸頭孢噻利200 mg·kg-1。分別于給藥后0 min、5 min、15 min、30 min、45 min、1h、1.5h、2h、3h、4h、6h眼內(nèi)眥取血，分離血漿，-40℃低溫保存。(8)藥動(dòng)學(xué)分析:血漿樣品處理后，應(yīng)用HPLC法測(cè)定，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算硫酸頭孢噻利

7、的血藥濃度，DAS2.1.1軟件擬合，計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。采用SPSS13.1軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果:(1)硫酸頭孢噻利和內(nèi)標(biāo)的保留時(shí)間分別為為6.3 min，和11.4min，血漿內(nèi)源性雜質(zhì)不干擾測(cè)定。(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線Ⅰ:Y=0.0030X-0.0012(r=0.9994)，線性范圍5～100 mg·L-1，標(biāo)準(zhǔn)曲線Ⅱ:Y=0.0031X+0.023(r=0.9997)，線性范圍100～2000 mg·L-1。(3)回收率:標(biāo)

8、準(zhǔn)曲線Ⅰ低(10mg·L-1)、中(40 mg·L-1)、高(80 mg·L-1)三種模擬血漿樣品的絕對(duì)回收率分別是(96.07±2.10)％，(86.69±2.90)％和(85.46±5.26)％;標(biāo)準(zhǔn)曲線Ⅱ低（200 mg·L-1）、中(800 mg·L-1)、高(1600 mg·L-1)三種模擬血漿樣品的絕對(duì)回收率分別是(82.70±2.10)％，(89.30±1.63)％和(97.05±0.46)％。內(nèi)標(biāo)甲硝唑的絕對(duì)回收率為(8

9、0.33±2.85)％。標(biāo)準(zhǔn)曲線Ⅰ的相對(duì)回收率分別是(108.64±2.08)％，(101.04±2.36)％和(100.48±3.88)％;標(biāo)準(zhǔn)曲線Ⅱ的相對(duì)回收率分別是(91.37±2.43)％，(99.77±2.03)％和(98.85±0.57)％。(4)精密度:標(biāo)準(zhǔn)曲線Ⅰ日內(nèi)精密度RSD分別為2.07％，2.33％和3.86％;標(biāo)準(zhǔn)曲線Ⅱ日內(nèi)精密度RSD分別為2.66％，1.48％和0.58％。標(biāo)準(zhǔn)曲線Ⅰ的日間精密度RSD分別為4

10、.61％，2.65％和3.53％;標(biāo)準(zhǔn)曲線Ⅱ的日間精密度RSD分別為2.90％，0.59％和0.33％。(5)穩(wěn)定性:硫酸頭孢噻利血漿樣品-40℃保存5天及反復(fù)凍融3次后性質(zhì)穩(wěn)定，處理血漿樣品放置4h對(duì)測(cè)定無(wú)影響;(6)大鼠靜脈注射200 mg·kg-1硫酸頭孢噻利后，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù):t1/2分別為(1.56±0.41)h和(1.20±0.49)h，Cmax分別為(1314.4±196.7) mg·L-1和(1470.2±

11、321.4) mg·L-1，AUC0-t分別為(853.6±187.4) mg·h·L-1和(751.3±187.7)mg·h·L-1，AUC0-∞分別為(874.8±212.3)mg·h·L-1和(780.9±199.0)mg·h·L-1，V分別為(0.52±0.13) L·kgq和(0.45±0.16) L·kg-1，CL分別為(0.24±0.05) L·h-1·kg-1和(0.27±0.07) L·h-1·kg-1。
　　結(jié)