Grx1調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)谷胱甘肽化在酒精性肝病中的機(jī)制研究.pdf

1、目的：
　　谷氧還蛋白1（Glutaredoxin1，Grx1）是一種重要的巰基轉(zhuǎn)移酶，通過(guò)它的活性位點(diǎn)催化蛋白質(zhì)的去谷胱甘肽化。它維持細(xì)胞內(nèi)的氧化還原平衡，具有抗凋亡、抗氧化以及參與細(xì)胞分化等功能，其在許多疾病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要的作用。然而它在肝損傷及修復(fù)中的作用機(jī)制仍然是未知的。本實(shí)驗(yàn)以酒精性肝病模型探討Grx1調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)谷胱甘肽化在肝損傷中的機(jī)制，以便為臨床上治療類似機(jī)制的肝損傷提供新的治療靶點(diǎn)。
　　方法：

2、>　　將10-14周齡的C57BL/6雄性小鼠納入實(shí)驗(yàn)，Grx1-/-小鼠和WT小鼠分別被隨機(jī)分為對(duì)照組（Grx1-/--Control組和WT-Control組）和實(shí)驗(yàn)組（Grx1-/--ETOH組和WT-ETOH組）。本實(shí)驗(yàn)采用的是Gao-binge模型造模方法，在灌胃9h后收集血液和肝組織。檢測(cè)血清生化指標(biāo)ALT和AST以及TC、TG；HE觀察肝臟病理變化；油紅O染色觀察肝脂肪變；檢測(cè)肝組織氧化應(yīng)激指標(biāo)：GSH/GSSG和ROS；

3、TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡；western blot檢測(cè)Grx1、FasL、Fas、Pro-caspase3和cleaved c asp as e3的蛋白表達(dá)；免疫熒光檢測(cè)蛋白質(zhì)谷胱甘肽化（PSSG）以及P SSG與Fas的共表達(dá)；ELIS A檢測(cè)肝組織勻漿液的T NF-α；免疫組化檢測(cè)kup ffer細(xì)胞和Fas L。
　　結(jié)果：
　?。?）慢性酒精喂養(yǎng)誘導(dǎo)肝臟組織中Grx1蛋白表達(dá)增加（p＜0.001）和氧化應(yīng)激，且與 W

4、T-ETOH組相比，Grx1-/--ETOH組中GSH/GSSG比值下降得更為明顯（p＜0.05），而產(chǎn)生的ROS更多；
　　（2）HE染色、油紅 O染色、血清生化指標(biāo)（p＜0.05）以及TUNEL染色都表明Grx1-/--ETOH組肝損傷更重；
　?。?）慢性酒精喂養(yǎng)后Fas、FasL和Cleaved caspase3表達(dá)增加，且與WT-ETOH組相比，Grx1-/--ETOH組中Fas表達(dá)沒(méi)有顯著的差異（p＞0.05），

5、FasL表達(dá)反而減少（p＜0.05），而Cleaved caspase3表達(dá)增加（p＜0.01）；
　　（4）與WT-ETOH組相比，Grx1-/--ETOH組中 PSSG和Fas-SSG表達(dá)均增加，這與 Grx1的功能有關(guān)；
　　（5）與WT-ETOH組相比，Grx1-/--ETOH組中TNF-α反而減少（p<0.01）；（6）與WT-ETOH組相比，Grx1-/--ETOH組中F4/80標(biāo)記的kupffer細(xì)胞數(shù)量反而減