阿苯達唑?qū)用}再狹窄的治療效應(yīng)和機制研究.pdf

1、第一部分、阿苯達哩對血管平滑肌細胞的生物學(xué)效應(yīng)和機制研究
　　目的:探討阿苯達挫體外對人主動脈平滑肌細胞增殖遷移的影響，并進一步分析其可能涉及的作用機制。
　　方法:體外實驗分為濃度梯度試驗與機制探討兩部分。其中濃度梯度部分設(shè)為4組:陰性對照組(A組)、阿苯達挫濃度組0.25μM(B組)、0.5μM(C組)、1μM(D組)；利用 CCK-8檢測各組細胞在干預(yù)24h、48h、72h后細胞增殖能力的變化；劃痕實驗檢測各組細胞在A

2、BZ干預(yù)10、24h后細胞遷移力的變化；Transwell小室實驗檢測各組細胞在ABZ干預(yù)10、24h后細胞遷移的變化；機制探討分為流式細胞儀檢測各組細胞在干預(yù)后24h細胞周期分布的變化，TUNEL檢測細胞調(diào)亡；Realtime PCR和 Westem blot技術(shù)測定阿苯達挫干預(yù)48h各組細胞中平滑肌表型轉(zhuǎn)換相關(guān)分子SMA、SM22α、MYHll在mRNA、蛋白水平上的相對表達量；Western blot檢測各組細胞在干預(yù)48h后PI

3、3K/AktAnTOR表達量的變化。
　　結(jié)果:CCK8實驗結(jié)果顯示ABZ對人主動脈平滑肌細胞 HASMCs表現(xiàn)出較好的增殖抑制作用，并對人臍靜脈內(nèi)皮細胞的增殖無明顯作用(24h內(nèi))；細胞劃痕實驗結(jié)果表明ABZ可有效地抑制 HASMCs遷移和侵襲并呈劑量依賴性；ABZ可明顯抑制人臍靜脈內(nèi)皮細胞的血管生成；PI單染和Western blot結(jié)果顯示ABZ可將HASMC細胞周期阻滯在G2M期，并且細胞周期相關(guān)蛋白細胞周期依賴性激酶1(

4、CDKl)和細胞周期蛋白B1(cyclinB1)的表達受到明顯抑制；RTPCR和 Western blot結(jié)果顯示ABZ上調(diào)平滑肌細胞表型轉(zhuǎn)換相關(guān)分子SMA、SM22α、MYHI1；另外ABZ對HASMC細胞調(diào)亡無明顯作用；ABZ下調(diào)PI3K/Akt/mTOR信號通路，且呈濃度依賴性。
　　結(jié)論:阿苯達挫使血管平滑肌細胞的增殖、遷移及侵襲能力明顯下降。其機制可能是阻滯了細胞周期并且影響了平滑肌細胞的表型轉(zhuǎn)化，最后細胞的增殖、遷移能

5、力下降。
　　第二部分、阿苯達睡對小鼠股動脈損傷再狹窄的治療效應(yīng)
　　目的:探討阿苯達挫在體內(nèi)對股動脈損傷后再狹窄的作用。
　　方法:
　　(1)實驗動物分組:假手術(shù)組，對照組和阿苯達挫組；建立小鼠股動脈導(dǎo)絲損傷模型:將8-12周BALB/c雄性小鼠分為3組，分別為假手術(shù)組，對照組和阿苯達挫組;阿苯達挫0.5mg灌胃4周，對照組PBS灌胃；
　　(2)HE(蘇木精-伊紅染液)染色:4周后，取損傷側(cè)股動脈做H

6、E染色，鏡下觀察并計算新生內(nèi)膜面積；
　　(3)Evans藍染色:損傷模型建立第3、7天，與尾靜脈注射Evans藍染液，取出股動脈，統(tǒng)計Evans藍染色比例，觀察內(nèi)皮再完全化程度。
　　結(jié)果:
　　(1)小鼠股動脈導(dǎo)絲損傷模型建立成功，HE染色結(jié)果顯示，對照組內(nèi)膜明顯增厚，官腔狹窄，阿苯達挫可顯著抑制平滑肌細胞的增殖和遷移，新生內(nèi)膜面積減少，內(nèi)膜/中膜比值明顯下降；
　　(2)Evans藍染色是評價內(nèi)皮再完全化的