DNA氧化性損傷生物標(biāo)志物的化學(xué)發(fā)光分析新方法及應(yīng)用研究.pdf

1、化學(xué)發(fā)光分析是根據(jù)化學(xué)反應(yīng)產(chǎn)生的光輻射確定物質(zhì)含量的一種痕量分析方法。它具有靈敏度高、線性范圍寬、分析快速和儀器設(shè)備簡單、便于操作等優(yōu)點(diǎn)，目前已在無機(jī)物、有機(jī)物、醫(yī)用藥物殘留、生物大分子、生物天然活性物質(zhì)等的痕量分析測定方面都得到了廣泛應(yīng)用。
　　大量研究表明DNA氧化性損傷與腫瘤的發(fā)生關(guān)系密切。8-羥基-2’-脫氧鳥嘌呤核苷(8-hydroxy-2’-deoxyguanosine，8-OHdG)是DNA氧化損傷的最主要產(chǎn)物，可作

2、為一種生物檢測標(biāo)記物，對DNA氧化損傷導(dǎo)致腫瘤發(fā)生的機(jī)制進(jìn)行研究。
　　本論文建立了使用化學(xué)發(fā)光法測定8-OHdG的新方法，并結(jié)合商用小柱固相萃取及自制8-OHdG分子印跡聚合物作為填充物固相萃取前處理方法，對健康人體和乳腺癌患者尿樣中8-OHdG的含量進(jìn)行了分析檢測并比較；進(jìn)一步地，基于一些天然抗氧化活性物質(zhì)對羥基自由基等氧化性自由基的清除作用，建立了使用化學(xué)發(fā)光法研究油茶殼提取液中原花青素對DNA氧化損傷保護(hù)作用的方法。

3、>　　全文共包括以下五個(gè)部分內(nèi)容：
　　第1章：緒論部分。首先簡單的回顧了化學(xué)發(fā)光法的發(fā)展歷史、闡述了化學(xué)發(fā)光的基本原理以及特點(diǎn)；然后較為全面的介紹了目前已報(bào)道的8-OHdG的測定方法及原花青素抗氧化活性的研究方法；在上述基礎(chǔ)上，對目前研究存在的問題作了簡單歸納，提出了本文的研究意義。最后提出了本論文的研究目的和內(nèi)容。
　　第2章：利用8-OHdG加入酸性鄰菲咯啉(Phen)-Cu化學(xué)發(fā)光體系中使體系的發(fā)光信號(hào)增強(qiáng)的特點(diǎn)，建

4、立了一種使用化學(xué)發(fā)光法測定8-OHdG的新方法。在實(shí)驗(yàn)最佳條件下，方法的線性范圍是1.67～333.33μg/L，工作曲線為ΔI=23.96c(μg/L)+860.85(ΔI是相對發(fā)光強(qiáng)度，c是8-OHdG濃度)，相關(guān)性系數(shù)R為0.9995，方法檢測限(S/N=3)為0.83μg/L。
　　第3章：建立了人尿樣品中8-OHdG的固相萃取-化學(xué)發(fā)光檢測方法。尿樣經(jīng)C18/OH柱固相萃取前處理后，用化學(xué)發(fā)光法檢測其中的8-OHdG濃度

5、。實(shí)驗(yàn)對正常人尿樣和乳腺癌患者尿樣中的8-OHdG的含量分別進(jìn)行了測定。測得正常人尿樣中8-OHdG含量為5.77±1.56μg/L，而乳腺癌患者尿樣中8-OHdG含量為67.60±27.99μg/L，是正常人的10倍多。該結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道水平基本一致。
　　第4章：分別以8-OHdG結(jié)構(gòu)相似物鳥苷(guanosine）和脫氧鳥苷（deoxyguanosine，dG）為模板分子，4-乙烯基吡啶和丙烯酰胺為功能單體，N,N-亞甲基雙丙

6、烯酰胺為交聯(lián)劑，偶氮二異丁腈為引發(fā)劑，采用本體聚合法制備了8-OHdG的分子印跡聚合物。將所得的分子印跡聚合物作為固相萃取的固定相， 應(yīng)用于尿樣的分離和富集，回收率為86.8％～105.9%,相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為3.0～3.5%。通過與商用C18及C18/OH固相萃取柱比較后，發(fā)現(xiàn)分子印跡聚合物作為固定相選擇性較好，更適合用于對人體尿樣等復(fù)雜樣品的化學(xué)發(fā)光及液相色譜等測定的前處理。
　　第5章：基于TSPC對羥基自由基的清除作