miR-4299靶向調(diào)控ST6GALNAC4對人甲狀腺濾泡狀癌侵襲性的影響.pdf

1、目的:通過研究6種唾液酸糖基轉(zhuǎn)移酶基因（ST6GALNAC家族）在甲狀腺濾泡狀癌細(xì)胞株及患者標(biāo)本中的差異性表達(dá)，分析基于miR-4299為探針靶向調(diào)控ST6GALNAC4在濾泡狀癌侵襲性的功能機(jī)制，從而為甲狀腺濾泡狀癌的診斷和治療提供新的靶點(diǎn)。
　　方法:(1)采用實(shí)時(shí)定量PCR對6種ST6GALNAC家族基因水平的表達(dá)進(jìn)行檢測，檢測其在兩組具有不同侵襲能力的甲狀腺濾泡狀癌細(xì)胞株（FTC-238和FTC-133）與人甲狀腺正常細(xì)胞

2、株(Nthy-ori3-1)，以及臨床甲狀腺濾泡狀癌組織和癌旁組織中的表達(dá)差異，篩選出差異表達(dá)3倍以上的唾液酸糖基轉(zhuǎn)移酶基因。
　　(2)特異性下調(diào)、上調(diào)差異表達(dá)的ST6GALNAC4基因，檢測其在干擾、過表達(dá)前后，F(xiàn)TC細(xì)胞株體內(nèi)外侵襲能力的改變。
　　(3)采用實(shí)時(shí)定量PCR篩選出兩組FTC細(xì)胞以及癌組織和癌旁組織中差異性表達(dá)的miR-4299，通過構(gòu)建miR-4299的mimics，antagomir，agomir寡核

3、苷酸，分析其對ST6GALNAC4的表達(dá)調(diào)控。采用熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)進(jìn)一步分析miR-4299靶向調(diào)控ST6GALNAC4。
　　(4)特異性下調(diào)或上調(diào)miR-4299，檢測在干擾、過表達(dá)前后FTC細(xì)胞體內(nèi)外侵襲能力改變以及細(xì)胞內(nèi)ST6GALNAC4表達(dá)水平的差異。
　　結(jié)果:(1) ST6GALNAC家族在兩組人FTC細(xì)胞株及FTC患者標(biāo)本中的表達(dá)具有顯著差異。
　　(2)特異性下調(diào)FTC-238細(xì)胞中ST6GALNA

4、C4后，該細(xì)胞在體內(nèi)外的侵襲能力減弱（*P＜0.05）;特異性上調(diào)FTC-133細(xì)胞中ST6GALNAC4后，該細(xì)胞在體內(nèi)外的侵襲能力增強(qiáng)（*P＜0.05）。
　　(3) miR-4299在人FTC細(xì)胞株、FTC患者標(biāo)本中的表達(dá)具有顯著差異;特異性下調(diào)或上調(diào)miR-4299的表達(dá)介導(dǎo)ST6GALNAC4的表達(dá);miR-4299調(diào)控ST6GALNAC4的表達(dá)。
　　(4)特異性上調(diào)FTC-238細(xì)胞中的miR-4299，該細(xì)胞

5、體內(nèi)外的侵襲能力明顯減弱，細(xì)胞內(nèi)ST6GALNAC4的表達(dá)水平顯著降低;特異性下調(diào)FTC-133細(xì)胞中的miR-4299，該細(xì)胞在體內(nèi)外的侵襲能力明顯減弱，細(xì)胞內(nèi)ST6GALNAC4的表達(dá)水平顯著增加。
　　結(jié)論:(1) ST6GALNAC家族在人甲狀腺濾泡狀癌細(xì)胞株、臨床甲狀腺濾泡狀癌患者標(biāo)本中的表達(dá)具有顯著差異，這些特征性改變與人甲狀腺濾泡狀癌侵襲能力具有一定的相關(guān)性。
　　(2) miR-4299可能通過靶向調(diào)控ST6