β-Catenin調(diào)控間充質(zhì)干細(xì)胞向HGF的定向遷移.pdf

1、惡性膠質(zhì)瘤是最為常見的原發(fā)性腦瘤，因其具有極強(qiáng)的浸潤(rùn)和擴(kuò)散能力，常用的醫(yī)療手段很難將其治愈，近年來研究發(fā)現(xiàn)間充質(zhì)干細(xì)胞（marrow mesenchymal stem cells, MSCs）具有自我更新和趨向膠質(zhì)瘤遷移的能力，成為治療此類疾病的種子細(xì)胞。為了達(dá)到理想的治療效果，必須保證移植的MSCs能夠定向遷移到病灶或受損部位，因此研究調(diào)控MSCs定向遷移的機(jī)制成為熱點(diǎn)之一。大量文獻(xiàn)報(bào)道多種細(xì)胞因子（PDGF、IGF、EGF和Ang-

2、1等）和信號(hào)通路（PI3K/Akt、MAPK/ERK1/2、JAK/STAT、Rho和TGF-β/Smad等）參與調(diào)控MSCs的定向遷移，在hMSCs中Wnt3a能夠通過激活Wnt/β-catenin信號(hào)通路促進(jìn)細(xì)胞的遷移，而在小鼠肝細(xì)胞中HGF也能通過c-met上調(diào)細(xì)胞核內(nèi)β-catenin的累積促進(jìn)細(xì)胞趨化性遷移，目前關(guān)于HGF和Wnt/β-catenin信號(hào)通路協(xié)同調(diào)控MSCs遷移的作用鮮有報(bào)道。本文旨在研究β-catenin在H

3、GF誘導(dǎo)MSCs趨化性遷移的過程中的作用。
　　本研究采用Percoll密度梯度離心法從大鼠骨髓中成功分離、培養(yǎng)并擴(kuò)增得到高純度的MSCs。提取MSCs的總RNA，RT-PCR克隆得到SD大鼠β-catenin及其激活型ΔN90的cDNA，利用AdEasyTM系統(tǒng)構(gòu)建重組腺病毒載體Ad-β-catenin和Ad-ΔN90，構(gòu)建成功的重組腺病毒在QBI-293A細(xì)胞中包裝并擴(kuò)增，獲得高滴度的病毒子，感染細(xì)胞以獲得高表達(dá)β-caten

4、in的MSCs。同時(shí)針對(duì)SD大鼠β-catenin基因由Abgent公司設(shè)計(jì)并合成FAM熒光標(biāo)記的siRNA（FAM-siRNA），用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染MSCs降低β-catenin的表達(dá)。為進(jìn)一步檢測(cè)β-catenin在MSCs定向遷移過程中的作用提供有利的工具。
　　首先研究β-catenin對(duì)MSCs遷移的影響，利用Boyden chamber研究發(fā)現(xiàn)β-catenin的抑制劑FH535上調(diào)β-catenin的磷酸化使其降解，顯著性

5、的抑制MSCs的遷移。β-catenin激活劑LiCl通過上調(diào)β-catenin促進(jìn)的MSCs遷移呈濃度依賴效應(yīng)，當(dāng)LiCl濃度為10mM時(shí)，MSCs達(dá)到最大的遷移數(shù)量，而50ng/ml的Wnt3a也能促進(jìn)MSCs的遷移。Duun chamber和劃痕實(shí)驗(yàn)也證實(shí)了這些結(jié)果。免疫熒光染色結(jié)果顯示LiCl和Wnt3a能夠促進(jìn)β-catenin的入核，而FH535能夠抑制此種效應(yīng)。以上說明β-catenin參與調(diào)控MSCs的遷移。
　　

6、在探討β-catenin調(diào)控MSCs趨向HGF定向遷移的實(shí)驗(yàn)中，Boyden chamber和Dunn chamber裝置研究發(fā)現(xiàn)FH535和低表達(dá)β-catenin（si-β-catenin）抑制MSCs趨向HGF的定向遷移，而LiCl、Wnt3a和過表達(dá)β-catenin都能夠促進(jìn)MSCs的遷移并增強(qiáng)HGF對(duì)MSCs的趨化效應(yīng)。Western blot發(fā)現(xiàn)HGF能促進(jìn)β-catenin和ABC蛋白水平的增加并抑制其磷酸化，同時(shí)HGF

7、促進(jìn)了β-catenin的入核，而FH535能抑制這種效應(yīng)。說明β-catenin參與調(diào)控MSCs趨向HGF的定向遷移。
　　綜上，β-catenin能被LiCl和Wnt3a上調(diào)，從而促進(jìn)MSCs遷移，而FH535促使β-catenin降解，抑制LiCl和Wnt3a對(duì)MSCs遷移的作用。β-catenin的上調(diào)也能夠促進(jìn)HGF誘導(dǎo)的MSCs定向遷移，而抑制β-catenin的表達(dá)則降低了MSCs向HGF定向遷移的能力。本研究為進(jìn)一