姜黃素介導(dǎo)THP-1來源巨噬細胞極化及其機制的研究.pdf

1、目的：本研究旨在探討姜黃素對THP-1來源巨噬細胞極化及炎癥反應(yīng)的影響，并且進一步探討其可能的分子機制。
　　方法：用佛波酯(Phorbol myristate acetate,PMA)誘導(dǎo)人THP-1單核細胞分化為巨噬細胞，并用1μg/ml脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)+20 ng/ml人干擾素γ(interferon-γ,INF-γ)使細胞進一步極化為M1型巨噬細胞。用氚標(biāo)胸腺嘧啶核苷([3H]thym

2、idine,3H-TdR)滲入法檢測不同濃度姜黃素對巨噬細胞增殖的影響。分別用熒光定量Real-time PCR和酶聯(lián)免疫吸附實驗方法檢測各分組中炎癥因子TNFα、IL-6及IL-12的轉(zhuǎn)錄和分泌情況。流式細胞術(shù)和Western blot方法檢測各組巨噬細胞的極性情況及Toll樣受體4(Toll like receptor4，TLR4)-絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)/核

3、因子κB(nuclear factorκB，NF-κB)信號通路的表達和磷酸化水平。另外，TLR4小干擾RNA和MAPK抑制劑用于研究TLR4-MAPK/NF-κB信號通路在介導(dǎo)巨噬細胞極化中的作用，以探討姜黃素在調(diào)控巨噬細胞極化的分子機制。
　　結(jié)果：姜黃素在0~30μmol/L的濃度范圍內(nèi)，對THP-1來源巨噬細胞增殖無明顯抑制作用，且其本身不影響巨噬細胞極性。姜黃素能明顯抑制M1型巨噬細胞的極性及TNFα、IL-6和IL-1

4、2的表達，且呈濃度依賴性(P<0.05)。與對照組相比，姜黃素能明顯抑制TLR4的表達及下游MAPK(p38，ERK1/2及JNK1/2)和NF-κB(IκBα及p65)通路的磷酸化(P<0.05)。同時，與空白對照組相比，TLR4小干擾RNA和MAPK抑制劑(SP600125，SCH772984及Skepinone-L)可分別減少姜黃素對M1型巨噬細胞極性的抑制作用(P<0.05)。
　　結(jié)論：姜黃素可通過抑制TLR4-MAPK