2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、肝X受體(LiverXReceptors,LXRs)具有廣譜抗炎特性,然而LXRs是否在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控炎性細胞因子表達尚未闡明。mRNA降解調(diào)控是轉(zhuǎn)錄后調(diào)控基因表達的重要方式之一,AREs(AU-richelements)介導的mRNA降解是炎性細胞因子mRNA代謝的一個共有方式。Tristetraprolin(TTP)作為一種典型的ARE結(jié)合蛋白,參與調(diào)控多種細胞因子mRNA降解。為闡明LXRs是否通過調(diào)控炎性細胞因子mRNA降解發(fā)揮

2、抗炎特性,本研究通過體外細胞實驗探討LXRs在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控基因表達的作用及機制。
  方法:佛波酯誘導THP-1單核細胞分化為巨噬細胞,LXRs激動劑T0901317(10μM)預處理THP-1巨噬細胞6h后,予以脂多糖(10ng/mL)刺激6h,利用ELISA、PCR、WesternBlot等技術(shù)檢測TNF-α、IL-6、IL-1β和TTPmRNA及蛋白表達水平。不同因素處理組的THP-1巨噬細胞加入5ug/mL放線菌素D(A

3、ctinomycinD,ActD)終止轉(zhuǎn)錄,阻斷轉(zhuǎn)錄后的不同時間點提取RNA,利用實時熒光定量PCR技術(shù)不同時間段TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA的表達水平,以阻斷轉(zhuǎn)錄初始mRNA為標準計算mRNA殘留比例。通過小分子siRNA技術(shù)進行細胞轉(zhuǎn)染18h后,Westernblot、ELISA檢測TTPsiRNA沉默TTP表達效果和炎性細胞因子表達影響,實時熒光定量PCR檢測不同處理因素組炎性細胞因子mRNA表達水平。
  結(jié)果

4、:T0901317預處理顯著抑制脂多糖誘導的THP-1巨噬細胞IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA及蛋白表達,且T0901317預處理顯著上調(diào)LPS誘導的THP-1巨噬細胞TTP表達。放線菌素D阻斷轉(zhuǎn)錄后60,90,120min時間點,T0901317預處理的THP-1巨噬細胞顯著抑制LPS誘導的TNF-α,IL-6,IL-1βmRNA表達水平,殘留比例顯著低于單純LPS處理組,說明T0901317預處理促使LPS誘導的TNF-α,

5、IL-6,IL-1βmRNA降解。TTPsiRNA轉(zhuǎn)染的THP-1巨噬細胞顯著下調(diào)TTP的表達,并明顯抑制T0901317下調(diào)炎性細胞因子表達和促進炎性細胞因子mRNA降解的作用。
  結(jié)論:1.LXRs活化轉(zhuǎn)錄后調(diào)控THP-1巨噬細胞炎性細胞因子mRNA降解。2.LXRs通過TTP促使LPS誘導的THP-1巨噬細胞炎性細胞因子mRNA降解。本研究明確了LXRs轉(zhuǎn)錄后調(diào)控炎癥反應的新型分子機制,為多靶點廣譜抗炎治療全身炎癥反應綜合

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